diagnóstico por componentes en alergia alimentaria
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Diagnóstico por componentes en alergia alimentaria
María Luisa Sanz
Departamento de Alergología e Inmunología Clínica
Pamplona 7-8 Mayo 2010
Diagnóstico de precisión en Alergia alimentaria
-Verificar los Ac IgE específicos funcionalmente relevantes
Distinción: Sensibilización-AlergiaProblemas reactividad cruzada:
Pólen-alimentoAlimento-alimento:PP!!
-Identificación de las moléculas o epítopes responsables
Herramientas que han abierto nuevos horizontes en el diagnóstico de alergia
alimentaria
Harwanegg C. et al CEA 2003
Pasado y presente del diagnóstico alergológico
Diagnóstico basado en componentes permite Identificar los patrones individuales de
sensibilización frente a:
-Diferentes proteínas de una única fuente alergénica
-Proteínas homólogas en diferentes alimentos
-Diferentes epítopes de una molécula alergénica
Pru p 1
Pru p 3
Pru p 4
Patrones diferentes de sensibilización
según área geográfica
Asociación riesgo: LTP Asero 2000
Gamboa PM et al Allergy 2008
Pru p 1
Pru p 3
Pru p 4
Norte de Europa
Pru p 1
Pru p 4
SAO
Europa mediterránea
Pru p 3
Fernández-Rivas M et al. J Allergy Clin Immunol. 2003 Oct;112(4):789-95.
Síntomas sistémicos
Component-resolved diagnosis (CRD)
Diagnóstico basado en componentes permite Identificar los patrones individuales de
sensibilización frente a:
-Diferentes proteínas de una única fuente alergénica
-Proteínas homólogas en diferentes alimentos
-Diferentes epítopes de una molécula alergénica
PR-10
Reactividad cruzada
Sindromes de reactividad cruzada
y componentes alergénicos
Ácaros/Gamba/Caracol/Cucaracha
Cerdo-gato
Látex-frutas
Artemisia-apio-zanahoria- especias
Polen de abedul-alimentos (manzana, zanahoria, avellana, apio, patata)
Gramíneas-melocotón
Cacahuete-guisante
Tropomiosina
Albúmina sérica
Quitinasas de clase I
Profilinas, Proteínas alto peso molecular
PR-10 (homólogos de bet v 1)
Profilinas
Vicilina
Diagnóstico basado en componentes permite Identificar los patrones individuales de
sensibilización frente a:
-Diferentes proteínas de una única fuente alergénica
-Proteínas homólogas en diferentes alimentos
-Diferentes epítopes de una molécula alergénica
PersistenciaGravedad...
Epitopos IgE en los alergenos alimentarios
SPOT μArrays
J.Lin, H.Sampson. Curr Opin Allergy Clin Immunol 2009
μArrays-TAB
Familias principales de alérgenos
68
56
51
42
32
27
25
25
24
22
19
18
17
14
14
12
12
12
12
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80
Prolamin superfamily
Tropomyosins
Profilins
EF hand domain
Cupin superfamily
Trypsin-like serine proteases
Bet v 1-related proteins
Expansins, C-terminal domain
Lipocalins
PR-1 proteins
Subtilisin-like serine proteases
Papain-like cysteine proteases
ATP:guanido phosphotransferases
Glutathione S-transferases, C-terminal ...
Group 2 mite allergens
Caseins
Expansins, N-terminal domain
Polygalacturonases
Serum albumins
Thaumatin-like proteins
143 familias de alérgenos que contienen 889 alérgenos
http://www.meduniwien.ac.at/allergens/allfam/
Karin Hoffmann-Sommergruber & E. N. Clare Mills
Anal Bioanal Chem (2009) 395:25–35
Familias mas importantes de alérgenos alimentarios vegetales
N=8
Karin Hoffmann-Sommergruber & E. N. Clare Mills
Anal Bioanal Chem (2009) 395:25–35
Familias mas importantes de alérgenos alimentarios animales
N=8
Alérgenos moleculares o componentes alergénicos
Bases de datos
www.allergen.org web internacional de nomenclatura de alérgenos (IUIS-WHO)
www.allergome.org web sencilla, completa y con numerosos links
www.ifr,ac.uk/protall base de datos de Ag alimentos. Proyecto UE
Panalérgeno
PR-10
Bétula,manzana, cataña...
Homólogo de Bet v1
-Proteínas homólogas
-Molécula compartida por diferentes fuentes alergénicas separadas filogenéticamente, con estructura y función similar que explican fenómenos de reactividad cruzada
Panalérgeno
-Proteínas homólogas
-Molécula compartida por diferentes fuentes alergénicas separadas filogenéticamente, con estructura y función similar que explican fenómenos de reactividad cruzada
Tropomiosina
Panalérgenos
Moléculas relacionadas con
Pru p 3
Allergome Sequence Homology ring
Moléculas relacionadas con
Der p 10
Allergome Sequence Homology ring
• Los microarrays son matrices bidimensionales de alta densidad donde se ha inmovilizado material biológico que permite la automatización simultánea de miles de ensayos en paralelo.
¿Que es un microarray?
• El material inmovilizado, que se utiliza como sonda biológica, pueden ser ácidos nucleicos (Oligonucleótidos o cDNA), proteínas, (anticuerpos, enzimas, etc.), pequeñas moléculas, etc.
Primeros estudios de Microarrays aplicados a alergiacon extractos alergénicos completos
Detection of Multiple Allergen-specific IgEs on Microarrays by Immunoassay with Rolling Circle Amplification
Steve Wiltshire, Shawn O’Malley, Jeremy Lambert, Kari Kukanskis, David Edgar, Stephen F. Kingsmore and Barry Schweitzer
Clin Chem 2000
Microarrayed allergen molecules: diagnostic gatekeepers for allergy treatment
Reinhard Hiller, Sylvia Laffer, Christian Harwanegg, Martin Huber, Wolfgang M. Schmidt, Anna Twardosz, Bianca Barletta, Wolf M. Becker, Kurt Blaser, Heimo Breiteneder, Martin Chapman, Reto Crameri, Michael Duchêne, Fatima Ferreira, Helmut Fiebig, Karin Hoffmann-Sommergruber, Te Piao King, Tamara Kleber-Janke, Viswanath P. Kurup, Samuel B. Lehrer, Jonas Lidholm, Ulrich Müller, Carlo Pini, Gerald Reese, Otto Scheiner, Annika Scheynius, Horng-Der Shen, Susanne Spitzauer, Roland Suck, Ines Swoboda, Wayne Thomas, Raffaela Tinghino, Marianne Van Hage-Hamsten, Tuomas Virtanen, Dietrich Kraft, Manfred W. Müller, and Rudolf Valenta
Journal of the Federation of American Societies for Experimental Biology 2002
Presentan la nueva tecnología de microarrays para el diagnóstico en alergia tipo I
Utilizan proteínas naturales purificadas o recombinantes procedentes de 35 diferentes fuentes alergénicas, que las fijan a portas preactivados mediante técnica de microarrays
La mayor diferencia con otras tecnologías convencionales es que el microarray contiene las moléculas definidas de cada alérgeno como reactantes.
Permite la identificación de las moléculas responsables
VENTAJAS
Miniaturización del diagnóstico alergológico
Va a hacer realidad el sueño de conocer todas las especificidades de la IgE en un paciente alérgico
CEA 2007
Diagnóstico molecular de la hipersensibilidad mediada por IgE Diagnóstico basado en componentes
Microarray
7,5 cm2,5 cm
Microarray de IgE específica
Determinación semi-cuantitativa la IgE específica frente a 103 componentes alergénicos, recombinantes y naturales purificados, mediante la tecnología MICROARRAY ISAC 103 ( Phadia, Suecia).
Microarrays de proteínas para la determinación de IgE específica
Matriz de componentes alergénicos en la determinación de sIgE
ISU
Incubación muestraIncubación muestra Revelado.Se añade espAc
Revelado.Se añade espAc
Obtención sueroObtención suero
Escanea el biochipEscanea el biochip Análisis de imagenAnálisis de imagen
Duración: 3 hoursDuración: 3 hours
Duración: 10 min.Duración: 10 min.
Obtención InformeObtención Informe
Wash
Lavado
<50 l suero
Determinación semi-cuantitativa de la expresión de IgE específica frente a 103 proteínas purificadas y recombinantes
MICROARRAY ISAC 103(Immuno solid phase chip)
PANEL DE ALERGENOS DEL MICROARRAY ISAC 103
(Immuno solid phase chip)
ISAC CDR 103
Alérgenos de origen vegetal-Marcadores especie específicos
-Marcadores de reactividad cruzada
ISAC CRD 103
Proteínas de almacenaje
- Proteínas procedentes de las semillas sirviendo como materia prima durante el crecimiento de la planta.-A menudo prot estables y resistentes al calor causando reacciones en alimentos cocinados
Alérgenos de origen vegetalISAC CRD 103
Omega 5 gliadinaAsociada a anafilaxia inducida por ejercicio
Proteínas PR-10 Homologos Bet v 1 • En el Norte y Centro de Europa el abedul o los pólenes relacionados son considerados los sensibilizadores más importantes causantes de síntomas respiratorios.-La presencia de proteínas PR10 en vegetales y frutas puede causar síntomas debido a reactividad cruzada con dichos pólenes.
-Se puede asociar a SAO
Alérgenos de origen vegetalISAC CRD 103
LTP • Proteínas termoestables a proteasas digestivas, causantes de reacciones en alimentos cocinadosasociadas a reacciones sistémicas graves
Panalérgeno que muestra una gran homología y reactividad cruzada entre profilinas de diversas especies vegetales, incluso entre aquellas alejadas filogenéticamente. En algunos casos asociados a SAO en síndromes a polen-frutas.
Alérgenos de origen vegetal-Marcadores de reactividad cruzada
Marcador de sensibilización de reactividad cruzada por determinantes carbohidratos.Raramente asociado con síntomas clínicos pero posible causa de reacciones en algunos pacientes
Alérgenos de origen vegetal-Marcadores de reactividad cruzada
Alérgenos no vegetales-Marcadores especie específicos
Anisakis Ani s 1
Marcadores de reactividad cruzada
Ag mayoritario del pescado y panalérgeno de este grupo.Marcador de reactividad cruzada entre especies de pescados y anfibios.Proteína estable al calor y a la digestión, causando reacciones con alimentos cocinados
Proteína fijadora de actina localizada en las fibras musculares.Marcador de reactividad cruzada entre artrópodos (crustáceos, arácnidos e insectos)
Estudios de validación de la técnica de microarrays en alergia alimentaria
N=130 niños con sospecha de alergia alimentaria mediada por IgEEn todos ellos Prueba de Provocación con leche de vaca y/o huevo
Allergy 2008
Prueba cutáneaIgE esp (CAP)Microarrays (ISAC CRD 51, VBC Genomics)
Ovomucoide (Gal d 1)Ovoalbúmina (Gal d 2)Lysozyma (Gal d 4)
Alfa lactoalbumina (Bos d 4)Beta lactoglobulina (Bos d 5)Caseína (Alfa, beta, kappa)
n=130
DBPCFC PP abierta
145 provocaciones
PP realizadas PP positivasLeche 85 42 (49%)Huevo 60 45 (75%)
Asociación entre el nº de componentes reconocidos en el microarray y CAP frente al extracto
PP como parámetro de referencia para análisis de curvas ROC para PC , CAP y Microarray
LECHE
HUEVO
LECHENo encuentran dif significativas entre los valores de área bajo la curva (AUC) entre PC, CAP y Microarray
HUEVOSolo el Gal d 4 (lisozima) arroja valores inferiores de AUC, respecto al extracto completoEl resto de componentes, respuesta similarLa combinacion de todos en Microarray similar a CAP y PC
Puntos de decisión clínica
LECHE n=85 HUEVO n=60
Ninguna prueba in vivo o in vitro permite el diagnostico definitivo en el 100% de los casos de Alergia alimentaria
Los microarrays frente a componentes de leche y huevo nos dan resultados equivalentes a los encontrados con PC y/o IgE esp
Ningún componente exclusivo discrimina entre una sensibilización irrelevante y una sensibilización genuina
Lactoferrina bovina es un Ag mayoritario en alergia a leche.
Caseinas: alfa s1 es mas alergénica
Perfiles de reconocimiento de Ag lecheen alérgicos y no alérgicos
Frecuencia de reconocimiento de alérgenos en alérgicos y no alérgicos
40 sueros con IgE total entre 72 y 18591 kIU/L e IgE específica a proteínas de leche entre 3 y 190 kIU/L.
6 sueros con IgE total entre 66 y 13242 kIU/L y sin alergia a leche, como controles negativos.
Tecnica uarray propia
Leche
Dermatitis atópica por alimentos con PP positiva o negativa
IgE, IgG4 Ag-específica mediante microarrays (tecnica propia) para leche, clara de huevo, soja y trigo.
Pediatric allergy Immunol 2007
La media de los valores IgE/IgG4 es mayor en el grupo PP +
El valor IgE/IgG4 podría indicarnos la gravedad y el progreso de la dermatitis atópica de un paciente y ser mejor indicador que la IgG absoluta.
sIgE trigo sIgG4 trigo
Mapeo de Epitopos. Microarray Peptidos
• Flinterman AE, Knol EF, Lencer DA, Bardina L, den Hartog Jager CF, Lin J et al. Peanut epitopes for IgE and IgG4 in peanut-sensitized children in relation to severity of peanut allergy. J Allergy Clin Immunol 2008; 121(3):737-43.
• Shreffler WG, Beyer K, Chu TH, Burks AW, Sampson HA. Microarray immunoassay: association of clinical history, in vitro IgE function, and heterogeneity of allergenic peanut epitopes. J Allergy Clin Immunol 2004; 113(4):776-82.
• Shreffler WG, Lencer DA, Bardina L, Sampson HA. IgE and IgG4 epitope mapping by microarray immunoassay reveals the diversity of immune response to the peanut allergen, Ara h 2. J Allergy Clin Immunol 2005; 116(4):893-9.
• Cerecedo I., Zamora J., Shreffler G.W., Lin J, Bardina L, Dieguez M.C. et al. Mapping of the IgE and IgG4 sequential epitopes of milk allergens using a peptide microarray-based immunoassay. J Allergy Clin Immunol 2008.122:589-594
CACAHUETE LECHE
Estudios de perfiles de sensibilización frente a epítopos diversos o fracciones de proteínas útiles en predecir la historia natural de la alergia alimentaria
Jarvinen et al JACI 2002
Jarvinen et al JACI 2007
Vila et al CEA 2001
Reconocimiento Epitopos Lineales
Aplicación clínica
Diseño de dianas terapéuticas futurasElección de pacientes para tratamiento
IT ( inmunoterapia) ITO (inducción tolerancia oral)
¿Biomarcadores de distintos fenotipos clínicos?
Gravedad clínica Pronóstico (persistencia de alergia)
Reconocimiento Epitopos Lineales LECHE
• Persistencia de alergia leche• 96 decapéptidos con aa de αs1-caseina. SPOT• 24 niños (persistente >9años, posible no-persistente <3años)
JACI 2001
Reconocimiento Epítopos Lineales LECHE
5 epitopes:
2 en alfa s1 caseína
1 en alfa s2 caseína
2 en kappa caseína
no fueron reconocidos por los alérgicos transitorios y sí por los persistentes
Peptido AA 123-132 de la alfa s1 caseína: Marcador de persistencia
Reconocimiento diferencial de epítopes frente a proteínas de leche de vaca entre pacientes
-alergia a leche persistente (n=10)
-alergia transitoria (n=10)
Reconocimiento Epitopos Lineales LECHE
JACI 2002
Epitopos informativosde persistencia de alergia a leche
Reconocimiento Epitopos Lineales
LECHE
Peptide-specific IgE for individual peptides at time of clinically relevant allergy in 3 groups of patients:
(A) with persistent CMA, and
(B) with late and
(C) with regular tolerance development. Letters highlight the patients with the highest levels for the individual peptides.
Beyer K, Jarvinen KM, Bardina L, Mishoe M, Turjanmaa K, Niggemann B, Ahlstedt S, Venemalm L, Sampson HA J Allergy Clin Immunol. 2005,116:704-5.
-Desarrollan un microarray de proteínas alergénicas de leche para mapear sus epítopos a gran escala, mediante péptidos de 20 amino ácidos incluyendo las secuencias primarias de αs1-caseina, αs2-caseina, β-caseina, κ-caseina y β-lactoglobulina.
-Comprueban su reproducibilidad, especificidad y sensibilidad.
-En base al solapamiento de amino ácidos, son identificados nuevos epítopos:
αs1-caseina, Aas 49-62; αs2-caseina, Aas 69-77; β-caseina, Aas 16-39; β-lactoglobulina, Aas 106-119.
El inmunoensayo basado en microarrays de péptidos puede proporcionar un método para el diagnóstico de alergia a leche
Mapeo de Epitopos. Microarray PeptidosLECHE
J Allergy Clin Immunol 2010;125:695-702
Sujetos con alergia a leche reconocen una mayor diversidad de epítopos unidos a IgE comparado con los que han superado su alergia, y éstos, similar a los sujetos tolerantes.
LECHE
La unión de mayor número de péptidos a IgE está asociada a reacciones más graves durante las pruebas de provocación.
LECHE
J Allergy Clin Immunol 2010;125:695-702
Reconocimiento Epitopos Lineales Huevo
Pacientes con alergia persistente a huevo producen IgEesp frente a mayor número de epítopes lineales y conformacionales de ovomucoide y albúmina
Metodo screening para alergia persistente a huevo
Desarrollan un microarray basado en péptidos de cacahuete para mapear epítopos.
213 péptidos de 20 aminoácidos solapados de las secuencias primarias de Ara h 1
Ara h 2 y Arah 3.
77 pacientes alérgicos a cacahuete
15 controles.
J Allergy Clin Immunol 2004;113:776-82
Reconocimiento Epitopos Lineales Cacahuete
A. Frecuencia de reconocimiento de cada péptido en el microarray:
87% de los sueros de pacientes fueron positivos al menos a un péptido.
J Allergy Clin Immunol 2004;113:776-82
B. Distintos perfiles de reconocimiento de la IgE de 8 pacientes.
Gran variabilidad entre los pacientes respecto al número de epítopos y el patrón de péptidos reconocidos.
Reconocimiento Epitopos Lineales Cacahuete
LA DIVERSIDAD DE IgE CORRESPONDE A LA GRAVEDAD DE LA HISTORIA CLÍNICA
J Allergy Clin Immunol 2004;113:776-82
Los pacientes con historia de reacciones multisistémicas más graves reconocen un mayor número de epítopos. A
Determinando los niveles de IgE específica a alérgenos recombinantes mediante CAP-FEIA, no hay diferencia entre pacientes con reacciones más o menos graves. B
38 Pacientes con clínica
14 sólo cutánea
24 sistémica
Reconocimiento Epitopos Lineales Cacahuete
array CAP
Reconocimiento Epitopos Lineales. CACAHUETE
Estudio prospectivo. 24 Niños. PO.-IgE e IgG4 epitopos peptidos (15 aa) Arah1, Ara h2, Ara h3.
-Correlacion positiva entre diversidad de epítopos reconocidos por la IgE de un paciente y la gravedad
-Tras 20 meses de seguimiento el patrón se mantiene estable.
-No encuentran un grupo de péptidos que se asocie a gravedad
Ara h 1aa
Ara h2 aaAra h3 aa
ControlesTolerantes
Graves PP. Negativa
Reconocimiento Epitopos Lineales. CACAHUETE
J Allergy Clin Immunol 2010;125:191-7
OBJETIVO: diferenciar entre alergia a cacahuete y tolerancia mediante el diagnóstico basado en componentes (CRD) usando microarrays.
METODOS: Comparar el perfil de sensibilización entre niños sensibilizados a cacahuete (IgE > 0,2 kUa/L), alérgicos (n=29) o tolerantes (n=52), usando microarrays con 12 componentes (alérgenos mayores y alérgenos con potencial reacción cruzada).
Cacahuete
PANEL DE COMPONENTES Y CARACTERISTICAS DE LOS DIFERENTES PERFILES DE RECONOCIMIENTO DE COMPONENTES
CONTROL NEGATIVO
ALERGIA A CACAHUETE Y GRAMINEAS
ALERGIA A CACAHUETE
ALERGIA A GRAMINEAS Y SENSIBILIZACION ASINTOMATICA
A CACAHUETE
Cacahuete
PANEL DE COMPONENTES Y CARACTERISTICAS DE LOS DIFERENTES PERFILES DE RECONOCIMIENTO DE COMPONENTES
CONTROL NEGATIVO
ALERGIA A CACAHUETE Y GRAMINEAS
ALERGIA A CACAHUETE
ALERGIA A GRAMINEAS Y SENSIBILIZACION ASINTOMATICA
A CACAHUETE
CONCLUSIONES:
Hay diferencias notables entre el patrón de sensibilización de niños alérgicos y tolerantes a cacahuete.
El componente Ara h 2 es el más importante para predecir alergia clínica a cacahuete. El CRD usando microarray puede facilitar el diagnóstico de alergia a cacahuete.
Cacahuete
Verde - Toleran cacahuete
Rojo- Alérgicos a cacahuete
Cacahuete
Desarrollan un microarray de moléculas alergénicas purificadas y recombinantes para diferenciar el diagnóstico entre alergia alimentaria inducida por trigo, alergia a polen y el “asma de panadero”.
Alérgenos de semillas de trigo recombinantes (10, 37, 38, 112, 123, 126).
Extracto de polen de trigo (WP).
Alérgenos de polen recombinantes (Phl p ).
Marcadores de IgE (1 -13).
Trigo
n = 22
n = 17
n = 32
Trigo
Usando 4 de los alérgenos recombinantes de semillas de trigo se puede diferenciar entre alergia al trigo respiratoria y alimentaria, ya que los pacientes con asma del panadero están sensibilizados a éstos alérgenos, mientras que los de alergia alimentaria no están sensibilizados.
Es posible desarrollar un microarray basado en alérgenos recombinantes de trigo y alérgenos de polen útil para la discriminación de las 3 condiciones clínicas de alergia trigo.
1. Asma del panadero.
2. Alergia alimentaria al trigo.
3. Alergia al polen de gramíneas.
Trigo
Nuestra experiencia
DIAGNOSTICO por Componentes perfiles de sensibilización en alergia a
melocotón
TABIgE esp
DIAGNOSTICO POR MICROARRAYS
LTP0
1
2
3
4
5
6
7
8
TPM
9
10
11
63%
PROFILIN
9% 9%
N = 7
N = 1 N = 1
Nu
mb
er
of
cases
11 Pacientes con Anafilaxia postprandial8 adultos (4 mujeres y 4 varones) y 3 niños varones. 4 de estos pacientes presentaron anafilaxia por ejercicio postpandrial.
Cabrera et alAllergy 2008
-Sensitisation to LTPs , detected by Microarray ISAC CRD, was found in 63% of our patients with anaphylaxis, so it should be studied in patients with this pathology, given its ubiquity in different vegetables.-The microarray technique allows a more accurate diagnosis of sensitisation in some pathologies, such as anaphylaxis.
Acaros-gamba
Tropomiosinas
Der f 1 Der f2 Der p1 Der p2 Der p 10 D1 Pen i 1 Pen m1 Per a 7 Hel as 1 Ani s 3
NAS 37,71 68,86 41,36 70,78 3,83 7,79 6,3 2,92 3,34 3,31
AAL 114,68 26,92 68,65 26,9 38 11,57 9,55 3,32 2,96 10,46
IGR 0 21,68 0 25,32 26,98 17,5 19,46 12,89 7,28 9,57 10,27
DRT 9,15 5,04 11 6,93 9,34 >100 10,63 8,02 3,37 5,15 6,17
JFD 0 0 0 0 125,25 51,78 57.57 142,13 135,16 78,57
GCR** 0 0 0 0 27,5 5,6 12,87 15,27 27,18 28,94 21,97
* tropomiosina recombinante de gamba
** Detector de marisco. IT sl ácaros
CAP
gamba
caracol
cucarachaCAP
Anisakis
p4 f351*
2,79
3,51
2,28 23,2
Der p 10Per a 7Ani s 3Pen i 1Pen m 1
Tropomiosinas testadas en el microarray.
-mismo patrón de reactividad -alta homología entre todas ellas
CASOS CLÍNICOS
•Paciente varón 12 años
•Clínica de asma bronquial y rinoconjuntivitis de abril a junio, que precisa de tratamiento diario
•Con la ingesta de cacahuetes, cuadro de edema y urticaria generalizada
IgE total: 907 kUA/lIgE esp
Alternaria:13,9 KUA/lPhleum G5: 7,09
kUA/lOlivo t9: 8,02 KUA/lPlantago: 7,41 KUA/lCacahuete:>100
kUA/l Melocotón:4,72 kUA/l
Paciente polínico con alergia alimentaria
LTP
Profilinas
Profilinas• Sensibilización a profilinas, lo que
justifica la positividad a múltiples pólenes en pruebas cutáneas y a los alimentos vegetales.
• Sensibilización a LTP justifica la clínica sistémica con cachuete y la positividad del melocotón en prueba cutanea.
• Sensibilización subclínica al ciprés.
Paciente varón de 22 años con episodios repetidos (3) compatibles con anafilaxia realizando ejercicio físico al aire libre.
Desde la infancia rinoconjuntivitis estacional que ocasionalmente precisa de antihistamínicos
Triptasa urg: 10,90
bas: 4,70
IgE total 670 kU/L
IgE esp:
gram1: 1,88 kU/L
rgram1: 6,27 kU/L
trigo:0,32 kU/L
omega5-gliadina: 5,72 kU/L
Paciente anafilaxia por ejercicio
Paciente varón de 22 años con episodios repetidos (3) compatibles con anafilaxia realizando ejercicio físico al aire libre.
Desde la infancia rinoconjuntivitis estacional que ocasionalmente precisa de antihistamínicos
Exploraciones
Triptasa urg: 10,90
bas: 4,70
IgE 670
IgEAg: gram1: 1,88
rgram1: 6,27
trigo:0,32
omega5-gliadina: 5,72 kU/L
•Rinoconjuntivitis. Sensibilización a gramíneas
•Anafilaxia inducida por ejercicio. Sensibilización al trigo (omega5-gliadina)
•Varón de 5 años, diagnosticado de asma bronquial mal controlado, rinitis persistente y anafilaxia con marisco.
Primera consulta
•IgE total 1483 KU/L
•IgE Ag (CAP) D.pteronyssinus 7KU/L, gamba 13 KU/L
Segunda consulta:
•Asma bronquial controlado con corticoides inhalados y antileucotrienos.
•Medidas de desalergenización ambiental.
•IT??
Paciente alergia ácaros y alimentos
•Asma bronquial controlado
•Alergosis alimentaria crustáceos
•Sensibilización tropomiosina
•No inmunoterapia.
Mujer, 43 años. Trabaja en hostelería sin contactar con alimentos. Desde los 18 años con la ingesta de huevo no cocinado: - prurito faríngeo,
- dificultad respiratoria y para la deglución - edema labial.
Al contacto con huevo (no con la cáscara) y con pollo: - prurito palmar - lesiones “maculares” blanquecinas en palmas de las manos
Años más tarde con huevo cocinado y productos que contienen huevo dificultad respiratoria y para la deglución En ambientes donde hay periquitos o cuando se cocina huevo o pollo: malestar general Anteriormente toleraba huevo en todas sus presentaciones. Evita la ingesta de huevo y de aves (codorniz, pollo...) de forma absoluta desde hace 4 años, permaneciendo asintomática durante este tiempo.
Durante su infancia convivió con gallinas !!!
Paciente Síndrome ave-huevo
Pruebas cutáneas (prick): Histamina 4x4 mm
Clara de huevo: 5x5 mm
Yema de huevo: 6x7 mm
Mezclas plumas pato-pollo: 4x3 mm
Canario plumas:4x4mm
IgE específica: - ovomucoide < 0,35 kUA/l
- ovoalbúmina 0,52 kUA/l
- Plumas de canario: 1,67 kUA/l
DIAGNÓSTICO
Síndrome de ave-Huevo
Diagnóstico molecular Microarray:
Unica positividad a Gal d 5 Alfalivetina o seroalbúmina del huevo
PARVÁLBUMINA
• Proteína muscular controla flujo de Ca++.
• Termoestable.
• Alérgeno mayoritario del pescado (b-parvalbúmina). Similitud entre diferentes especies.
• Menor en el músculo rojo ( atún, emperador tienen menor cantidad de parvalbúmina)
• En microarray: parvalbúmina de carpa y bacalao
0
5
10
15
20
25
30
35
caso1 caso2 caso3 caso4
IgE merluzaparvalbúmina carpaParvalbúmina bacalao
Ejemplo de cuatro casos en los que hay una relación directa entre el valor de IgE específica de merluza y parvalbúmina.
El diagnóstico por componentes mediante tecnología de microarrays de IgE específica
Conclusiones
-Perfiles de sensibilización-Confirma reactividades cruzadas-Precisión en las indicaciones del tratamiento mediante IT Ag-específica -Monitorización de la respuesta inmunológica tras IT
Diagnóstico refinado
-Biomarcadores de fenotipos clínicos
-Predicción de gravedad
-El análisis de microarrays abre nuevas opciones en el diagnóstico de alergia a alimentos.
-Permite medir un numero de proteínas mucho mayor para un mismo paciente.
-Sin embargo también es el mayor inconveniente de la técnica. Nuestro actual conocimiento del significado de resultados positivos a muchas proteínas es limitado.
-Para el buen uso de esta técnica en el diagnóstico de alergia alimentaria habrá que establecer los perfiles de los resultados en relación con el perfil clínico especifico para cada paciente.
-Hace falta un buen análisis. Valoraciones clínicas con un alto poder estadístico
Demasiada información no siempre es una buena información!!!
Pamplona 7-8 Mayo 2010
GRACIAS!!
Nuevo ISAC CRD 130
Nuevas proteínas de alimentos
Melocotón: Pru p 4 (profilina)Nuez: Jug r 1, Jug r 2, Jug r 3 y Jug r 4Anacardo : Ana o 2Cacahuete: Ara h 9Soja: Gly m 2sTrigo: Tri a 114 (LTP)Alforjón: Fag e 16 KDLeche: LactoferrinaClara de Huevo: Gal d 4 (lisozima)Gamba: Pen m2 y Pen M 4
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