determinacion de flavonoides
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Q.FMaría tsaeet Palacios palacios Guía de prácticas de Farmacognosla y Fltoquímlca
PRÁCTICA N° 08
DETERMINACiÓN DE FLAVONOIDES
8.1 FLAVONOIDES:
Los flavonoides, son compuestos fenólicos y son en su mayoría pigmentos
responsables de la coloración de numerosas flores y de algunos frutos. El
elemento común de estos compuestos se han descrito varios millares de los
mismos, esta relacionado con un núcleo básico: el 2-fenil cromano. Los
flavonoides se encuentras ampliamente distribuidos en el reino vegetal,
generalmente en la forma soluble de glicósidos. Sus propiedades
farmacológicas están asociadas con la reducción de la permeabilidad
capilar. Entre estos tenemos a la rutina, la hesperidina y la quercetina.
FlavonoIs
HO
R¡ R2 Aglycone
At OH H QuercetinOH H H Kaempferol
OH OH . MyricetinOCH3 H IsorhamnetinR2
OH O
OBJETIVOS:~ Determinar la presencia del flavonoide rutina y hesperidína.
~ Conocer las reacciones químicas de identificación para flavonoides.
8.2 DETERMINACiÓN DE LA RUTINA:
8.2.1 FUNDAMENTO:La rutina es un flavonoide que tiene una mejor solubilidad en medio
alcohólico, que se caracteriza por dar positiva la prueba de Shinoda con una
variación de color que depende del tipo de estructura, asimismo se
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Q.FMaría Isabel Palacios Palacios Guía de prácticas de Farmacognosia V Fltoquímica
determina sus grupos fenólicos con el F+3 y por dar fluorescencia frente a la
luz UV.
8.2.2 MUESTRA: Hojas de Ruta graveolans "Ruda"
8.2.3 MATERIALES Y REACTIVOS:
~ Éter etílico~ Equipo soxhlet» Beaker de 100 y 250mL» Mg metálico» Tubos de ensayo» Alcohol etílico>- H2S04 concentrado
~ HCI concentrado>- FeCb 1% y EtOH~ Lámpara de Luz UV~ Alcohol amilico» Placas cromatográficas~ Acetato de Plomo 5%
8.2.4 EXTRACCiÓN
Fraccionar las hojas y proceder a un desengrasado en soxhlet con éter, con
el fin de eliminar las grasas, resinas y otros constituyentes. Al residuo
tratarlo posteriormente con agua caliente y decantar el líquido sobrenadante.
Concentrar el extracto acuoso y dejar en reposo por 5 días, tiempo en el
cual cristalizará la rutina. Si se desea purificar, efectuar cristalizaciones
empleando alcohol y por último desecar.
8.2.5 REACCIONES DE IDENTIFICACiÓN
>- Reacción de Shinoda o Cianidina: Caracteriza compuestos de estructura
benzopirona Si la alícuota del extracto se encuentra en alcohol, se diluye
con 1mL de HCI concentrado y un pedacito de cinta de Mgo. Después de la
reacción se espera 5 minutos, se añade 1mL de alcohol amílico, se mezclan
fases y se deja reposar hasta que se separen.
o Si la alícuota del extracto os encuentra en agua, se procede de la
misma manera, a partir de la adición del HCI concentrado.
o El Ensayo se considera positivo, cuando el alcohol amílico se colorea
de amarillo, naranja, carmelita o rojo. Intensos en todos los casos.
>- Reacción con el FeCb 1%: Utilizar una solución acuosa de rutina, añadirle
gotas del reactivo de FeCb 1%.
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>- Observar a la Luz UV con y sin vapores amoníaco en un cromatograma
8.3 DETERMINACiÓN DE LA HESPERIDINA:
La hesperidina es un complejo cítroflavonolde que se encuentra en la
porción blanca y coloreada de la cáscara de naranja.
8.3.1 OBJETIVOS:
~ Determinar la presencia de hesperidina
8.3.2 FUNDAMENTO:
La Hesperidina, se caracteriza por ser soluble en alcohol diluido y como todo
flavonoide tiene fluorescencia frente a la Luz UV que se acentúa en medio
alcalino.
8.3.3 MUESTRA: Cáscara de Citrus sinensis "Naranja"
8.3.4 MATERIALES Y REACTIVOS:
~ Alcohol diluido~ NaOH 1°%~ Beaker de 100 y 250MI~ HC110%~ Pipetas de 5MI~ Tubos de Ensayo~ Lámpara UV>- CIFe3
~ Embudo);> H2S04 concentrado~ Papel Filtro);> HN03 concentrado~ HCI concentrado~ NaOH 30%>- NH3 QP~ Placas Cromatográficas
8.3.4 EXTRACCiÓN:
Tratar 5 9 de la parte blanca de la cáscara de naranja con una mezcla de 20
mL de alcohol diluido y 5mL de una solución de NaOH 10%, dejar en reposo
24 h Y añadirle HCI al 10% hasta pH 5, con lo que se consigue precipitar la
hesperidina.
Dejar en reposo y filtrar, el líquido filtrado se vuelve a dejar en reposo, filtrar
nuevamente sobre el anterior y lavar el pp. hasta reacción neutra.
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Posteriormente secar el residuo, con lo que se consigue que cristalice la
hesperidina.
8.3.5 REACCIONES DE IDENTIFICACiÓN:
>- Tratar mg del pp. más gotas de H.2S04 concentrado, inicialmente da
coloración amarillo rojizo, que por calentamiento pasa a rojo.
> Tratar mg del pp. más gotas de Hel concentrado, da coloración amarillo
intenso.
> Tratar mg del pp. más gotas de NaOH 30 %, da coloración amarillo naranja.
>- Reacción de Shinoda similar a la Rutina
>- Observar la Fluorescencia a la lámpara UV con y sin vapores de NH3 en un
cromatograma
8.4 RESULTADOS:
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8.6 CONCLUSIONES:
8.7 CUESTIONARIO:
~ Color de la fluorescencia de la rutina y la hesperidina
~ Qué color se observa con la rutina y la hesperidina después de hacer la
reacción de Shinoda.
~ Mencione otros tipos de flavonoides que existan y esquernatice su
estructura química.
~ De las reacciones de identificación del (1) al (4) explique por se producen
los cambios y/o aparición de las colo raciones.
~ A que cree que se deba que los flavonoides presenten fluorescencia.
~ Propiedades farmacológicas de los flavonoides.
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PRÁCTICA N° 9
DROGAS CON CUMARINAS E IRIDOIDES
9.1 DROGAS CON CUMARINAS
Las cumarinas son derivados de la -benzopirona, es una láctona
cíclica que se caracteriza por que dan fluorescencia frente a la Luz UV y que
se acentúa en medio alcaüno. El nombre de cumarina proviene de
"coumarou' nombre vernácula del "haba tonka" (Dipteryx odorata willd.), del
que se aisló en 1820. Casi todas las cumarinas se encuentran sustituidas en
7 por un hidroxilo.
Cumarina Fraxino
OCH3
HO~
HCO~O~O:3 .
OBJETIVO:
~ Determinar la presencia de cumarinas en Plantas Medicinales
~ Observar la Fluorescencia a la Luz UV
9.1.1 FUNDAMENTO:
Las cumarinas se extraen con acetona ó también en medio alcohólico dando
soluciones coloreadas. La Reacción de Baljet es para detectar grupos
lactónicos y la reacción del hidroxamato es por el grupo carbonilo y la amina
formándose un compuesto condensado.
9.1.2 MUESTRA: Cichorium intybus "Achicoria" y Taraxacum offinacinale "Diente
de León"
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9.1.3 MATERIALES Y REACTIVOS:» Matraz de 250 mi » NaOH 5%» Refrigerante » Hel 0.5 mol/L» Embudo » NaOH 2N» Tubos de ensayo » Ácido acético glacial» NaOH 5% > NH3~ N03Ag 1N en acetona » Clorhidrato de hidroxilamina en EtOH a110%~ FeCb » KOH 10%» Acido Pícrico 1% en EtOH
9.1.40BTENCfÓN:
Se toman 5 g de raíz, fresca o desecada, triturada y pulverizada y se le
adiciona 50 mL de acetona ó éter de petróleo, se le somete a una extracción
por reflujo por 30 minutos, obteniéndose una solución de color amarillo.
Filtrar.
9.1.5 REACCIONES DE IDENTIFICACiÓN:
~ Reacción de Baljet: Si la alícuota no se encuentra en alcohol, debe
evaporaras el solvente en un baño de agua y redisolverse en la menor
cantidad de alcohol (1 mI) se le adiciona 1 mI del reactivo de Baijet, formado
por cantidades iguales de NaOH 10% Y de Acido pícrico 1 % en EtOH que se
deben mezclar en el momento del ensayo y llevar a BM hasta la aparición
de una coloración 6 precipitado rojo (++ y ++++) respectivamente.
> Ensayo de Hidroxamato férrico: Una alícuota se coloca en un tubo y se
añade 1 gota de clorhidrato de hidroxilamina en EtOH al 10%. Se añaden
gotas de KOH 10% en etanol y se calienta hasta burbujeo, se añaden unas
gotas de ácido clorhídrico 0.5 mol/L y una gota de FeCh 1%. El desarrollo
de una coloración violeta (+), claro (++), intenso( +-H-) indica presencia de
cumarinas.
~ Del extracto tomar unos 5 mi y añadirle 2 mi de una solución de NaOH 5%,
se acentúa la coloración amarilla y se ve un tenue precipitado.
>- CCF.
o Sistema de solvente: CHCI3: AcOH:H20 (4:1:1)
o Soporte : Silicagel G
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o Revelador : Luz UV, Sol. de N03Ag 1N en Acetona,
NaOH 2N y EtOH(5:15) y AcOH glacial.
9.2 DROGAS CON IRIDOIDES:
Son monoterpenos que se caracterizan por un esqueleto biciclico
ciclopentapiránico, los iridoides toman su nombre de unas hormigas
australianas: el iridodial, es el compuesto más sencillo del grupo, se aisló a
partir de Iridomirmex y en estos insectos desempeña un papel de defensa.
Iridoide VaJepotriato Loganina
ORl
HO
Q-Gluc
Loganine
9.2.1 OBJETIVO
~ Determinar la presencia de iridoides en Plantas Medicinales
~ Detectar por cromatografía la presencia de iridoides
9.2.2. FUNDAMENTO:
Se fundamenta en una extracción del iridoide en una especie vegetal fresca
y su posterior determinación con vainillina en medio ácido.
9.2.3 MUESTRA: Plantago major "Llantén" - Valeriana officinalis "Valeriana"
9.2.4 MATERIALES y REACTIVOS
» Matraz de 250 mi » Metanol ó etanol Q.P.
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~ Capilar de vidrio ~ Vainillina
~ Papel de filtro ~ HCI
~ Alcohol de 70° ~ Placas cromatográficas
~ H2S04 concentrado ~ Anís aldehído
~ Ácido acético glacial ~ Lámpara UV
~9.2.5 EXTRACCIÓN
Macerar algunos gramos de hojas de Plantaga majar « llantén" o raíz de
Va/eríana Off valeriana", recién recolectados y finamente triturados en
cantidad suficiente de alcohol de 70' para cubrir y dejar en reposo por
espacio de 48 horas a temperatura ambiente. Filtrar.
9.2.6 REACCIONES DE IDENTIFICACiÓN
>- Tomar del extracto con un capilar y puntear en un papel de filtro unas 5 a 10
veces, dejando secar después de cada adición. Colocar en la mancha 1 ó 2
gotas de la solución reactivo de vainillina clorhídrica, calentar suaver:nente
por 5 minutos y observar la coloración persistente que oscila entre la gama
del rosado al rojo en caso positivo.
~ CCF
o Sistema de solvente: BuOH:AcOH:H20 (63:10:27)
o Soporte: Silicagel G
o Revelador: Vainillina Clorhídrica al 2%
• Anisaldehído en medio clorhídrico
• AcOH:HCI (2:8)
• Lámpara UV
9.3 RESULTADOS:
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9.5 CONCLUSIÓN:
9.6 CUESTIONARIO:
~ ¿Qué color de fluorescencia tiene la cumarina y cuando se añade
vapores de amoníaco que cambios se observa?
~ ¿Qué otras especies vegetales contienen glicósidos cumarinicos e
iridoides?
~ Importancia terapéutica de las cumarinas y los iridoides
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PRÁCTICA N° 10
DROGAS CON TANINOS GÁLlCOS y CA TÉQUICOS
COOH OG OH
08~OG ~OHHO
lB0,---- ,\ ~
,\\\
HO OH G -,OH Tanino gálico ° OH
IÁcido gálico G OH Catequina
10.1 OBJETIVOS:
~ Extraer los taninos de una droga vegetal
~ Caracterizar a los taninos mediante reacciones químicas de identificación y
diferenciación
~ Cuantificar espectrofotométricamente los taninos en plantas medicinales
10.2 FUNDAMENTO:
Los taninos son sustancias de composición quirrúca cornpieja, que a\
degradarse o hidrolizarse se obtienen polifenoles relativamente simples. En
general son polímeros de alto peso molecular que forman soluciones
coloidales en medio acuoso. Por su naturaleza fenólica reaccionan con las
sales de fierro dando coloraciones azules o verdes, tienen capacidad de
reducir al permanganato, forman complejos con cationes divalentes como el
Pb+2, Hg+2.
10.3 MUESTRAS:
Vainas de Caesalpínea spínosa "tara" -
Raíz de Krameria triandra "ratania del Perú"
Hojas de Piper elongatum "matico"
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10.4 MATERIALES Y REACTIVOS:
» Tubos de Prueba ~ FeCb 1%
» Matraz de 250 mL ~ KMn041%» Refrigerante » Acetato de Pb 5%» Cocina eléctrica » Acetato de Hg 5%» Papel de Filtro » Solución de gelatina» Embudo » Solución de alcaloides
10.5 EXTRACCiÓN:
Preparar extractos etanólicos al 50 % de las muestras con 48 horas de
anticipación, con agitación permanente con la finalidad de extraer los taninos
de las muestras y puedan ser utilizadas en las determinaciones cualitativas,
de diferenciación y de cuantifícación.
REACIONES CUALITATIVAS DE IDENTIFICACiÓN:
Filtrar los extractos y concentrar para reducir el volumen y prep~rar una
batería de tubos de prueba y realizar las siguientes reacciones:
REACCiÓN DE COLORACiÓN CON EL CLORURO FÉRRICO:
Tomar una alícuota de las muestras y añadirle gotas del reactivo de FeCb
1%; observar el color que se forman:
>- Color azul-negruzco: Taninos gálicos
>- Color verde-azulado: Taninos catéquicos
REACCiÓN DE ÓXIDO REDUCCiÓN:
Tomar una alícuota de las muestras y añadirle gotas del reactivo de KMn04
1%. La reacción es positiva si desaparece el color violeta del permanganato
REACCiÓN DE PRECIPITACiÓN:
Tomar una alícuota de las muestras y añadirle gotas de los reactivos de
Acetato de Plomo 5%, Acetato de Mercurio 5%, Acetato de Cu 5%. Observar
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la formación de precipitados por la formación de complejos metálicos o
tanatos de Pb, Hg Y Cu; respectivamente.
REACCiÓN DE DIFERENCIACiÓN: REACCiÓN DEL FORMOl
ClORHIDRICO O REACCiÓN DE STIASNY
Los taninos gálicos o catéquicos se hidrolizan en medio ácido y de forrnol.
Los taninos gálicos permanecen en solución, mientras que los taninos
catéquicos se polimerizan formando una sustancia insoluble de color rojo
llamado flobafeno o tanino rojo.
10.6 MATERIALES Y REACTIVOS:
~ Matraz de 250 mL ~ Embudo
~ Beaker ~ HCI concentrado
~ Refrigerante > Formol al 38-40%
~ Cocina eléctrica ~ Pipetas de 5,10 mL
> Papel de Filtro ~ FeCb
"10.7 PROCEDIMIENTO:
Tomar unos 50 mL de la muestra problema al 40%, añadir unos 5 mL de
HCI concentrado y 10 mL de Formol al 38-40% y llevar a ebullición por unos
30 minutos en un sistema de reflujo. Los taninos gálicos no forman
precipitados. Los taninos catéquicos forman precipitados insolubles de color
rojo. Enfriar y filtrar la solución, tomar una alícuota del filtrado y añadirle
gotas del reactivo de FeCI3 en presencia de acetato de sodio al 5%. Si se
forma una coloración azul oscura, indica la presencia de taninos gálicos o
elágicos.
10.8 CUANTlFICACIÓN DE TANINOS POR ESPECTROFOTOMETRIA:
MÉTODO DEL ÁCIDO FOSFOMOllBDICO
Se fundamenta en la capacidad reductora del tanino sobre el ácido
fosfomolíbdico que en medio alcalino da una coloración azul que puede ser
leído al espectrofotometro a 700 nm.
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:» Etanol
:» Balanza Analítica
> Erlenmeyer
~ Na2C03
:» Ácido tánico
:» Pi eta de 5mL, 1 mL 2 mL
:» Equipo de reflujo
> Tungstato de sodio
> Acido fosfomolíbidico
:» Embudo
> Papel de Filtro
> Fiola de 50 mL
10.8.1 MATERIALES Y REACTIVOS:
10.8.2 PROCEDIMIENTO
Pesar 10g de la droga en polvo, se lleva a un frasco cónico de 1000 mL con
500 mL de alcohol al 50%. Mantener en agitación durante 6 horas en un
agitador magnético, dejar en reposo por 8 horas, luego volver a agitar por 30
minutos y filtrar. Se transfieren 3 mL del filtrado a un matraz aforado y se
diluye con agua destilada hasta enrase (SOLUCIÓN MUESTRA).
Se prepara un juego de 4 matraces aforados de 50 mL cada uno y se rotula
como B (blanco), S (referencia), M1 y M2 (muestra problema) y se procede
de la siguiente manera:
REACTIVOS B P M1 Y M2Solución Muestra - - 1.0 mLSolución de Referencia - 3.0 mL -Agua destilada 5.0 mL 2.0 mL 4.0 mLReactivo para taninos 2.0 mL 2.0 mL 2.0 mLSe agita, se deja en reposo por 5 minutosSolución de Na2C03 20% 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mLSe completa con aqua destilada hasta enrase y se mezcla bien.
Leer la absorbancia de la solución de referencia y las muestras a 700 nm en
un término no mayor de 2 minutos.
10.8.3 CÁLCULOS:
o/ T . AmpxStxlOOO 100/0 anmos == . x
AstxMpx(IOO - %H)
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Amp = absorbancia de la muestra problema
Ast = Absorbancia del estándar
St = masa del estándar (g)
Mp = masa de la muestra problema (g)
%H = porcentaje de humedad de la droga
10.9 RESULTADOS:
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10.12
~
~
~
~
~
CUESTIONARIO:
Reacciones químicas de las pruebas de identificación para los tar¡¡;..•Mencione otros métodos de cuantificación de los taninos
¿Cuáles son las propiedades medicinales de los taninos?
¿Cuáles son las especies medicinales que poseen taninos?
¿Propiedades medicinales del Piper angustifolium "rnatico"?
____~~--~~--~~~~~--~~~--~~~~~-----------------87Universidad Los Ángeles de Chimbote I Escuela de Farmacia y Bioquímica
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