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Defectos en Células Fagocíticas y su Diagnóstico

JAIRO MUÑOZ CERÓN MD. Esp. MSc.Fundación Universitaria Sanitas

Facultad de Medicina

IDP

• Incidencia: 1/10,000 (2:1, ♂:♀)

• Distribución:

65%15%

5%10% 5%

Humorales

LT

Complemento

Fagocitos

Combinadas: LB LT

Fagocitos polimorfonucleares

• Producción, división y maduración en la médula

ósea (100.000 x 106 células por día)

• Circulación durante ~ 6-10 hs• Circulación durante ~ 6-10 hs

• Extravasación hacia los tejidos a través del endotelio

capilar

• Función efectora: Fagocitosis y lisis

• Deficiencias Cuantitativas

Neutropenia

Clasificación de los defectos en células fagocíticas

• Deficiencias Funcionales

Adhesión

Quimiotaxis

Fagocitosis

Microbicidas

Neutropenias

Neutropenia severa congénita: ELA2, R-GCSF,

RAS. RAN (<200/mm3).

• GFI1, HAX1 , Glucosa6PDH.• GFI1, HAX1 , Glucosa6PDH.

• Monocitosis

• Mcl-1(Antiapoptótica)

• Estrés RE.

Neutropenia cíclica

Anexina V

I. pr

opid

io

Neutropenias

10 10 10 10 100 1 2 3 4

8811.009

cMPO FITC ->

0 256 512 768 1024

8811.009

FSC-Height ->10 10 10 10 100 1 2 3 4

8811.009

CD45PECY5 ->

A

10 10 10 10 100 1 2 3 4

8911.015

CMPO FITC ->

10 10 10 10 100 1 2 3 4

8911.015

CD45 PECY5 ->

0 256 512 768 1024

8911.015

FSC-Height ->

B

Fagocitos polimorfonucleares

• Deficiencias Funcionales

Microbicidas

- Vía dependiente de O2: Enfermedad - Vía dependiente de O2: Enfermedad

granulomatosa crónica, deficiencia de

mieloperoxidasa, Glu-6-P dehidrogenasa, vía del

glutatión.

- Vía independiente de O2: Chediak-Higashi,

deficiencia de gránulos secundarios

Enfermedad granulomatosa Crónica (EGC)

• IDP, caracterizada por alteración NADPH Oxidasa e infecciones severas y recurrentes

(Dinauer et al., 1996).

• Prevalencia 1/200.000 a 1/250.000 RNV (Fleisher et al., 2009)

• Colombia ocupa el cuarto lugar en registro de casos a nivel latinoamericano (pacientes)

(Franco et al.,2009).

• Registro nacional de 18 pacientes con diagnostico de EGC (Franco et al.,2009)

• Diagnóstico por reducción de NBT y Citometría de flujo.

NADPH oxidasa

PKC

DAG o

PMA

PG

Modificado, Cell. Mol. Sci.2009;66: 553-558.

NADPH oxidasa

Especies reactivas del

oxígeno (EROs)

NADPHoxidasa

FuncionesDaño tisular

Presentación cruzada

Mutaciones en las subunidades de NADPH

Modificado, Semin Immunopathol. 2009; 30:209-235

Autosomal recessive CGD

<1%

NCF4 gene

123-Dihidrorodamina 123-Rodamina

C21H18N2O3

H202

C21H17ClN2O3

Análisis de la NADPH-oxidasa por la técnica de

123-Dihidrorodamina

Paciente 1

Sin estimulo PMA 1ug/ml

Control

IMF N: 1771

IMF M: 116

IMF N: 4.7

IMF M: 4.6

Paciente

Sin estimulo PMA 1ug/ml

.

IMF N: 4.7

IMF M: 4

N: Neutrófilos, M: Monocitos; IMF: Intensidad Media de Fluorescencia.

IMF N: 272

IMF M: 24

Disminución del estallido respiratorio en neutrófilos y monocitos del paciente con

respecto al control.

Paciente 2

Sin estimulo PMA 1ug/ml

Control

IMF N: 4.4

IMF M: 4.2

IMF N: 1489.7

IMF M: 64

IMF N: 12

Paciente

PMA 1ug/mlSin estimulo

Se observa una marcada disminución en el estallido respiratorio de neutrófilos y

monocitos del paciente.

IMF N: 4.0

IMF M: 3.9

IMF N: 12

IMF M: 10.5

N: Neutrófilos, M: Monocitos; IMF: Intensidad Media de Fluorescencia.

Madre del Paciente 2 (paciente 3)

En Rojo IMF Neutrófilos del

control: 1510

Subpoblación

celular

Paciente

IMF

Presencia de dos poblaciones de neutrófilos y monocito con diferente

IMF en la madre del paciente 2.

En Rojo IMF Monocitos del

control: 76.3

IMF

N1 1589.7

N2 26.6

M1 70.9

M2 13.3

Fagocitos polimorfonucleares

Gránulos de Chediak -Higashi

• Deficiencias Funcionales

Fagocitos polimorfonucleares

- Deficiencias de meléculas de adhesión

Deficiencia de Adhesión Leucocitaria Tipo 1

• 1980• 1 de cada 100.000 RNV• Glicoproteína 110kD• Autosómico recesivo• Autosómico recesivo• Infecciones por bacterias entéricas Gram negativas,

Staphylococcus aureus, Cándida.• Infecciones recurrentes en piel, TGI, Periodontales,

Cordón umbilical• Expresión de CD18 cuantificable.

DAL

Citometría de CD18

IMF N: 1397

IMF N: 19899

IMF N: 34932

Neutrófilos control Neutrófilos paciente

Paciente:

<10% de la

expresión de

CD18 del

control.

Citometría de CD18

CD18

control.

CD18

Paciente:

No incremento de

La expresión post

Activación.

DAL tipo 2

DAL

• Expresión anormal de

selectina E

• Deficiencia de Rac2:

Quimiotaxis,

Degranulación, NADPH

oxidasa.

• DAL 3

Otras Deficiencias Funcionales

Quimiotaxis

- Deficiencias de meléculas de adhesión, - Deficiencias de meléculas de adhesión,

periodontitis juvenil, deficiencia de β-actina,

quemaduras extensas, alcoholismo, Hiper IgE

Otras deficiencias funcionales

•Deficiencias Funcionales

Fagocitosis Fagocitosis

- Deficiencias de móléculas de adhesión

(mediado por Complemento), deficiencias de

anticuerpos, deficiencias de Complemento.

Deficiencia de NET ´s

Fagocitos mononucleares

• Células de estirpe mieloide producidas y maduradas en la médula ósea

• Circulan ~70 hs como monocitos, luego se extravasan hacia los tejidos transformándose en macrófagos tisulares

• Funciones: Fagocitosis y lisis, secreción de mediadores inflamatorios, presentación antigénica

MSMD

Citometría : IFNγ/IL-12/23

Detección de IL-12p40

Evaluación por citometría de flujo

CD64

IL-1

2p

40

LPS LPS+IFNγMONOCITOS

Síndrome MonoMac

Gracias……