contar células métodos para contar células electrónicos basados en la microscopía medidores de...

Contar células

Métodos para contar células

Métodos para contar

célulasElectrónicos

Basados en la microscopía

Medidores de la resistencia

Citómetro de flujo

Análisis de imagen

Hemocitómetro

Tinción de cultivos en monocapa

Métodos aproximados

Peso

Contenido de ADN

Contenido de proteínas

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El hemocitómetro o cámara de Neubauer

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(rojo)

(azul)

(verde)

(amarillo)(gris)

1 mm

Profundidad = 0,1 mm

La cuadrícula del hemocitómetro

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Se introduce la suspensión de células en el hemocitómetro

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La región de recuento del hemocitómetro

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La cámara de recuento del hemocitómetro

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Recuento de células con el hemocitómetro

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Observación con microscopio óptico y recuento de células

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Diferencias entre células vivas y muertas

Célula viva

Célula muerta

De las tres líneas, la del centro es la

que corresponde al límite del cuadrado

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Tinción de cultivos en monocapa

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Hay tres tipos de contadores electrónicos

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Funcionamiento del contador de células electrónico (1)

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Funcionamiento del contador de células electrónico (2)

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Es importante poner límites a los tamaños (diámetro celular) que se van a medir. El límite inferior elimina el

ruido electrónico y los residuos

celulares. El límite superior se pone en 30 micras o en

infinito.

Hay que establecer el rango de tamaños a medir

7,6 – 50 m

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El contador distingue las células muertas

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Con este contador no hay que marcar las células

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Recuento mediante análisis de imagen

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Fundamento del recuento de células por análisis de imagen

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Recuento de células por análisis de imagen

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Esquema del análisis de la imagen

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Recuento de células mediante citometría de flujo

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Citometría de flujo

La difracción de luz frontal permite contar las células y, a la vez, nos da información sobre su tamaño.

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Estimación del número de células a partir del peso

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Estimación del número de células a partir contenido proteico

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Método de Bradford: fundamento

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Método de Bradford: protocolo

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Estimación del número de células a partir contenido de ADN

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Determinación de ADN por la fluorescencia del H33258

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Estimación del ADN por la absorbancia en el ultravioleta

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Comparación de los diversos métodos para contar células

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Métodos para determinar la viabilidad de las células

Métodos para determinar la viabilidad de las células

Síntesis de novo de proteínas

Incorporación de 3H-timidina al ADN

Exclusión del azul tripán

Marcaje fluorescente con naranja de acridina

y ioduro de propidio

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Viabilidad celular mediante tinción con azul tripán

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Viabilidad celular mediante tinción con azul tripán

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Naranja de acridina: atraviesa la membrana celular y tiñe los

ácidos nucleicos, generando una intensa fluorescencia de color

verde a bajas concentraciones.

Ioduro de propidio: no atraviesa la membrana de células intactas, pero sí la de las células dañadas.

Se une a los ácidos nucleicos, desplazando al naranja de

acridina y genera una intensa fluorescencia de color rojo.

Viabilidad celular: Naranja de acridina + Ioduro de propidio

Células vivas

Células muertas

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Medida de la viabilidad celular a partir de la síntesis de proteínas

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Medida de la viabilidad celular a partir de la síntesis de ADN