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Biología molecular en el trasplante de

médula ósea

Linus Pauling, padre de la biología molecular

1990

Biología molecular en TMO:

ü Selección de donador ü Seguimiento de quimerismo ü Identificación de infecciones

En México se

trasplantan menos del 10% de los

pacientes quienes necesitan un TMO

90%

1988

1996

BBMT 2009; 15:1628

2000

El Método Mexicano: n  Fármacos accesibles (BU, Cy, FLU) n  Conducción extrahospitalaria n  Número ajustado de aferesis (1-6 x 106/Kg

células CD34) n  Pocas transfusiones n  No uso de ganciclovir n  No uso de Ig IV n  No uso de factores de crecimiento n  ILD sólo en caso necesario (< 5%)

El Método Mexicano:

n BSF: 4 mg/Kg, días -6, -5 n Cy: 350 mg/m2, días -4, -3, -2 n FLU: 30 mg/m2, días -4, -3, -2 n CyA: 5 mg/Kg, días –1 a +180 n MTX: 5 mg/m2 días +1, +3, +5, +11

403 alotrasplantes:

ü 13 días para > 500 granulocitos ü 12 días para > 20 000 plaquetas ü EICH aguda: 21% ü EICH crónica: 17% ü Mortalidad a 100 días: 17% ü Supervivencia a 150 meses: 48% ü Mediana de SV: 1350 días

0 20 40 60 80 100

403 alotrasplantes (165)

Hematology 2012; 17:195

1386 alotrasplantes

BBMT 2006; 12:422

Months after BMT

Princess Margaret, Toronto

Supervivencia global

CHMI + HUNL

TMO alogénico usando el “método Mexicano”

20 000 USD (300 000 USD en FHCC)

(500 000 USD en MDACC)

ü Causa menos EICH ü Es menos nefrotóxico ü Se asocia menos a reactivación de CMV ü Se puede emplear en niños ü Se puede emplear en sujetos añosos ü Tiene menos morbimortalidad ü Requiere menos transfusiones

TMO con el “método Mexicano”

ü “Cura” la misma proporción de pacientes ü No es una forma “sencilla” de trasplantar ü Necesita mucho apoyo de laboratorio ü No requiere de unidades especiales ü No requiere de un hospital ü Es mucho más barato

TMO con el “método Mexicano”

TMO en México: P Más pacientes trasplantados P Más pacientes curados P Más trabajos publicados ü Mejor educación de médicos ü Mejor atención médica

Biología molecular en TMO:

ü Selección de donador ü Seguimiento de quimerismo ü Decisión de trasplantar ü Definición de remisión ü Identificación de infecciones

Selección del donador:

ü Antígenos HLA A, B y DR ü Los antígenos se estudian por biología molecular ü Tres del padre, tres de la madre ü  Compatibilidad para TMO: 6 / 6 o 5 / 6

Molécula HLA

0 10 20 30 40 50 60

0

0.2

0.5

0.7

1

Time in months

Overall survival

6/6

5/6

2004

CTSP ± LD

Receptor Donador Quimera mixta

Quimera completa

R R R

RL RL RL

R R R

RL D D

D D D

D D D

D D D

D D D

D D

D D

D D

D D ! ! !QUIMERISMO

Quimerismo post-trasplante:

P XX / XY P Microsatélites

Enumeracion de cromosomas sexuales

X

Y

Microsatélites

Microsatélites

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14

MW O S TPOX FGA vW AMEL D5S818 D16S539

D R R O S O S O S O S

501 pb

404 pb 353 pb

242 pb

190 pb

147 pb

110 pb 89 pb

CITOMETRÍA DE FLUJO PARA GRUPOS SANGUÍNEOS

ERITROCITOS A+

PMT2LO6

Eritrocitos A+ (19.5%)

Respuestas en LGC: P Cariotipo

P BCR / ABL, PCR

P BCR / ABL, qPCR

2005

2008

Rev Invest Clin Méx 2004; 53:235-239

M3

M2

M4Eo

Reacción en cadena de la polimerasa

Marcadores moleculares en LMA 1) PML / RARa 2) AML1 / ETO 3) inv16 4) cKIT 5) CEBPA 6) NPM-1 7) FLT3 8) BCR / ABL

Marcador Riesgo Frecuencia

en LAM PML / RARa Favorable 12-25%

AML1 / ETO Favorable 7-8%

INV16 Favorable 7-9%

cKIT Desfavorable 5%

CEBPA Favorable 8%

NPM1 Favorable 25-35%

FLT3-ITD Desfavorable 18-20%

BCR / ABL1 Desfavorable 0.8-1.2%

Riesgos en LMA a)   Bajo

b)  Intermedio

c)   Alto

Riesgos en LMA a) Bajo:

PML / RARa inv 16 AML1 / ETO

Excepto si tiene FLT3 mutado

Riesgos en LMA b) Intermedio:

Cariotipo normal Trisomía 8 NPM-1 FLT3

CEBPA

Riesgos en LMA b) Alto:

Monosomía 5 Monosomía 7 Cariotipos complejos NPM-1 FLT3

CEBPA

Rev Invest Clin Méx 2005; 57:415

Rev Invest Clín Méx 2011; 63:25-30

Riesgo Hermano idéntico

ó compatible MUD, haploidéntico

ó cordón

Bajo, excepto: No No c-KIT Si Posible

Intermedio, excepto: Si Posible NPM1+/FLT3-ITD - Posible No CEBPA+/FLT3-ITD - Posible No FLT3-ITD + Si Si

Alto Si Si

FLT3

NPM1

Leucemia mieloblástica

Pronóstico FLT3 NPM1 Malo Positivo Negativo Intermedio Negativo Negativo Bueno Negativo Positivo

TMO en LMA

Hermano HLA compatible Cordón umbilical Haploidéntico MUD

TMO en LMA

Mieloablativo Intensidad reducida

2004; 45:1191 2004; 45:1191

2004

2007; 12:193

2007

2006

2006

Biología molecular (microsatélites) para demostrar

que las células leucémicas son del donador

2006

CMV

CMV en TMO

ü Antígeno pp 67 del CMV, definido por biología molecular, indica reactivación

ü Anti-CMV (IgG, IgM) indican exposición al virus

2004

American Journal of Hematology, (2004) in press

1Centro de Hematología y Medicina Interna de Puebla. Puebla, Mexico2Laboratorios Clínicos de Puebla, Puebla, Mexico

3Instituto Nacional de Ciencias Médicas y de Nutrición "Salvador Zubirán“, Mexico City4Departamento de Química y Biología, Universidad de las Américas-Puebla, Puebla Mexico

1,2Ruiz-Argüelles GJ, 1,2Gómez-Rangel JD, 3Ponce-de-León S, 3González-Déctor L, 2Reyes-Núñez V and 2,4Garcés-Eisele J.

The Mexican Schedule to Conduct AllogeneicStem Cell Transplantation Is Related to a Low Risk

Of Cytomegalovirus Reactivation And Disease.

American Journal of Hematology, (2004) in press

1Centro de Hematología y Medicina Interna de Puebla. Puebla, Mexico2Laboratorios Clínicos de Puebla, Puebla, Mexico

3Instituto Nacional de Ciencias Médicas y de Nutrición "Salvador Zubirán“, Mexico City4Departamento de Química y Biología, Universidad de las Américas-Puebla, Puebla Mexico

1,2Ruiz-Argüelles GJ, 1,2Gómez-Rangel JD, 3Ponce-de-León S, 3González-Déctor L, 2Reyes-Núñez V and 2,4Garcés-Eisele J.

The Mexican Schedule to Conduct AllogeneicStem Cell Transplantation Is Related to a Low Risk

Of Cytomegalovirus Reactivation And Disease.

La biología molecular es crítica en

el trasplante de médula ósea