“fortaleciendo las competencias del laboratorio...

QFB. María del Rosario Vázquez Larios

1er Encuentro de Innovación en el Laboratorio Clínico.

27 de Noviembre 2015

“Fortaleciendo las competencias

del Laboratorio Clínico”

CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS DE IDENTIFICACIÓN MICROBIANA

Métodos basados en criterios morfológicos

Métodos basados en tinción diferencial

Métodos basados en pruebas bioquímicas

Métodos basados en pruebas serológicas

Métodos basados en detección molecular

OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA

Examen del material fresco:

– Examen directo de las muestras.

– Directas/modificaciones

- Solución salina/agua estéril. - Hidróxido de potasio 10%. - Azul de metileno Loeffler - Lugol

Examen material fijado y coloreado:

- Tinción de Gram

- Tinción Ziehl Neelsen

- Naranja de acridina.

- Auramina Rodamina

IDENTIFICACION COCOS GRAMPOSITIVOS

BACTERIA CATALASA OXIDASA BACITRACINA 0.04 U

Staphylococcus + -- R

Micrococcus + + S

Enterococcus -- -- R

ESTAFILOCOCOS

BACTERIA Coagulasa Agar sal y manitol Agar DNasa

S. aureus + + +

Estafilococos coagulasa negativo

-- --/+ --

ESTAFILOCOCOS

BACTERIA Coagulasa Novobiocina Hemólisis

S. aureus + S BETA

S. epidermidis -- S NO?

S. saprophyticus -- R BETA

PRUEBAS BIOQUIMICAS: Azúcares, Urea VP.

GÉNERO STREPTOCOCCUS

Streptococcus.

Streptococcus pneumoniae.

Estreptococos ß-hemolíticos.

Estreptococos del grupo viridans.

Enterococcus.

Leuconostoc.

Pediococcus

Resistentes a vancomicina.

Facklam R. What happened to the Streptococci: Overview of Taxonomic and Nomenclature Changes. Clin. Microbiol. Rev:2002: 613-630.

CARACTERÍSTICAS

Cocos grampositivos.

Disposición en pareja o en cadenas.

Anaerobios facultativos.

Algunos poseen cápsula.

Catalasa negativa.

Bacterias Fastidiosas Requieren de CO2

24 a 48 horas para su crecimiento óptimo.

Facklam R. What happened to the Streptococci: Overview of Taxonomic and Nomenclature Changes. Clin. Microbiol. Rev:2002: 613-630.

CLASIFICACIÓN

Serología o sistema Rebeca Lancelfield (1930).

Polisacáridos de pared celular:

Grupos A, B, C, D, F y G.

Acidos lipoteicoicos:

Grupo D y Enterococos.

Facklam R. What happened to the Streptococci: Overview of Taxonomic and Nomenclature Changes. Clin. Microbiol. Rev:2002: 613-630.

-hemólisis

-hemólisis

-hemólisis

PATRONES DE HEMÓLISIS

Forbes. BA. Sahm DF. Weissfeld AS. Bailey & Scott`s. Diagnostic Microbiology. 10th Edition. Mosby. St Louis 1998.

CLASIFICACIÓN

Grupo serológico Hemólisis

S. pyogenes A

S. anginosus A, C, F, G

S. agalactiae B

S. dysgalactiea C, G

S. bovis/Enterococo D

E. grupo viridans No agrupables

S. pneumoniae No agrupable

Facklam R. What happened to the Streptococci: Overview of Taxonomic and Nomenclature Changes. Clin. Microbiol. Rev:2002: 613-630.

IDENTIFICACIÓN

LAP = Leucina aminopeptidasa PYR = Pyrrolidonylarylamidasa

Forbes. BA. Sahm DF. Weissfeld AS. Bailey & Scott`s. Diagnostic Microbiology. 10th Edition. Mosby. St Louis 1998.

IDENTIFICACIÓN

Forbes. BA. Sahm DF. Weissfeld AS. Bailey & Scott`s. Diagnostic Microbiology. 10th Edition. Mosby. St Louis 1998.

Streptococcus pneumoniae

Crecimiento en agar sangre

Hemólisis alfa o gamma

(+)

Optoquina

Pneumococo Solubilidad bilis

> 14 mm (< 14 mm)

(+)

Pneumococo Aglutinación

Forbes. BA. Sahm DF. Weissfeld AS. Bailey & Scott`s. Diagnostic Microbiology. 10th Edition. Mosby. St Louis 1998.

ESTREPTOCOCOS ß HEMOLITICOS

Crecimiento en agar sangre

Hemólisis ß

(+)

Bacitracina/serología

S. pyogenes Estreptococo grupo B o C

CAMP

S. equi S. agalactiae

(+) (--)

(+) (--)

Forbes. BA. Sahm DF. Weissfeld AS. Bailey & Scott`s. Diagnostic Microbiology. 10th Edition. Mosby. St Louis 1998.

PRUEBA DE CAMP

Staphylococcus aureus ATCC 33862

S. agalactiae Control +

Incubación s/CO2

Forbes. BA. Sahm DF. Weissfeld AS. Bailey & Scott`s. Diagnostic Microbiology. 10th Edition. Mosby. St Louis 1998.

CLASIFICACIÓN DE ESTREPTOCOCOS DEL GRUPO VIRIDANS

Grupo Especies

S. anginosus S. anginosus, S. constellatus,

S. bovis S. intermedius, S. alactolyticus, S. equinus.

S. mitis S. mitis, S. pneuminae, S. sanguis, S. parasanguis, S. gordonii, S. crista. S. oralis

S. mutans S. mutans, S. sobrinus, S. cricetus, S. ratus S. downei, S. macacae

S. salivarius S. salivarius, S. vestibularis, S. thermophilis

Sin agrupar S. acidominimus, S. sutis

Facklam R. What happened to the Streptococci: Overview of Taxonomic and Nomenclature Changes. Clin. Microbiol. Rev:2002: 613-630.

Crecimiento en agar sangre

Hemólisis alfa o gamma

(+)

Optoquina

Pneumococo Bilis esculina

Enterococos Estreptococos

grupo viridans

(+) (--)

(+) (-)

6.5% NaCl

PRUEBAS BIOQUIMICAS: Hidrólisis de esculina, hidrólisis de pirrolidonil-ß naftilamina (PYR), VP,

fermentación de carbohidratos (rafinosa, manitol, lactosa).

Hemólisis alfa o gamma

Optoquina

Pneumococo Bilis esculina

Enterococos Estreptococos

grupo viridans

(+) (--)

(+) (-)

6.5% NaCl

ENTEROCOCOS

ENTEROCOCOS

Medios de aislamiento primario:

Agar de MacConkey.

Agar EMB.

Medios selectivos.

Agar Salmonella Shigella.

Agar entérico.

Agar xilosa-lisina-desoxicolato.

ENTEROBACTERIAS

Características diferenciales:

Utilización de carbohidratos

Reacciones IMViC

Indol, RM, VP Citrato.

ENTEROBACTERIAS

Características diferenciales:

Producción de ureasa.

Descarboxilación de lisina, orinitina

y arginina.

Producción de ácido sulfhídrico

Movilidad.

ENTEROBACTERIAS

NO ENTEROBACTERIAS

Son incapaces de utilizar los carbohidratos como fuente de energía o que los degradan por la vía oxidativa.

Características diferenciales:

Oxidasa – positiva (generalmente).

Agar MacConkey (lactosa negativa)

Prueba OF

Acinetobacter Pseudomonas

NO ENTEROBACTERIAS

Características diferenciales:

Actividad citocromo oxidasa.

Crecimiento en agar MacConkey y SS.

Presencia de pigmento.

Reducción de NO3, NO2.

Producción de indol.

Producción de ureasa.

NO ENTEROBACTERIAS

Características diferenciales:

Sensibilidad a penicilina, colistina y polimixina.

Hidrólisis de la esculina.

Desarrollo a 42ºC.

Licuación de la gelatina.

Hemólisis

Utilización de citrato.

Hay más en ti, hay más

de lo que crees, puedes

hacer más de lo que

piensas, vales más de lo

que supones, a condición de

que pongas en ello tu pasión

y tu esfuerzo. “Plus est en

toi”, es una frase que

debieran ustedes recordar

cuando flaqueen. No voy a

rendirme, hay más ánimo

en mí, yo soy capaz de

hacer todavía más.

Dr. Ignacio Chávez