análisis por electroforesis en geles de poliacrilamida de fracciones obtenidas durante la...

Análisis por electroforesis en geles de poliacrilamida de fracciones obtenidas durante

la purificación por cromatografía de intercambio iónico.

Marcador o Estándar de Peso Molecular(valores en kiloDaltons)

225 kDa150100 75 50 (banda de mayor intensidad, señalada con una flecha) 35 25 15 10

GRUPO 3 - Gel NO Denaturante (al 12% )

1. Marcador Estándar

2. Extracto crudo – 2.5 uL

3. Extracto crudo – 3 uL

4. Extracto crudo – 5 uL

5. Tubo 3a (buffer sin NaCl) –fracción original.

6. Tubo 4c (0.5mM NaCl) -–fracción original.

7. Tubo 1d (1 mM NaCl) -–fracción original.

8. Tubo 4b (0.25 mM NaCl)-precipit.

9. Tubo 6c (0.5 mM NaCl) –precipit.

10. Tubo 6c (0.5 mM NaCl) – precipit.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

50 kDa

1. Marcador Estándar

2. Extracto crudo – 2.5 uL

3. Extracto crudo – 3 uL

4. Extracto crudo – 5 uL

5. Tubo 3a (en buffer fosfato)

6. Tubo 4c (0.5mM NaCl)

7. Tubo 1d (1 mM NaCl)

8. Tubo 4b (0.25 mM NaCl)-precipit.

9. Tubo 6c (0.5 mM NaCl) –precipit.

10. Tubo 6c (0.5 mM NaCl) – precipit.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

50 kDa

GRUPO 3 - Gel denaturante (al 12% )

GRUPO 2 - Gel denaturante (al 15% )

1. Tubo 2d (1 mM NaCl) - precipitado

2. Tubo 1d (1 mM NaCl) – fracción original

3. Tubo 1d (1 mM NaCl)- precipit.

4. Tubo 5b (0.25 mM NaCl) -precipitado

5. Tubo 4c (0.5 mM NaCl) -fracción original

6. Tubo 4c (0.5mM NaCl) - precipitado

7. Tubo 5b (0.25 mM NaCl) – precipitado

8. Marcador Estándar

9. Tubo 4a (buffer sin NaCl) –fracción original

10. Extracto crudo – 2.5 uL

NOTA : UTILIZAR ESTE GEL PARA HACER EL GRAFICO Y DETERMINAR EL PESO DE LA PIRAZINAMIDASA

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Pirazinamidasa

50 kDa

NOTA : Los datos de migración están en el último slide

Frente de corrida

Inicio de gel

GRUPO 2 - Gel NO Denaturante (al 12% )

1. Tubo 2d (1 mM NaCl) - precipitado

2. Tubo 1d (1 mM NaCl) – fracción original

3. Tubo 1d (1 mM NaCl)- precipit.

4. Tubo 5b (0.25 mM NaCl) -precipitado

5. Tubo 4c (0.5 mM NaCl) -fracción original

6. Tubo 4c (0.5mM NaCl) - precipitado

7. Tubo 5b (0.25 mM NaCl) – precipitado

8. Tubo 4a (buffer sin NaCl) –fracción original

9. Extracto crudo – 2.5 uL

10. Marcador Estándar

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

50 kDa

Pirazinamidasa??? Cree usted que se pueda tomar el tamaño calculado a partir de este tipo de gel como un dato preciso?

Datos de migración del Gel denaturante (al 15% ) del Grupo 2

Migración (cm) y Pesos Moleculares (kDa)

0,2 - 225 kDa0,3 - 1500,48 - 1000,65 - 751 - 50 (banda de mayor intensidad, señalada con una flecha) 1,4 - 351,9 - 25 3 - 153,6 - 10

4,6 - frente de corrida2,3 - Pirazinamidasa (carril 2)