a a a14[1] probióticos
Post on 12-Jun-2015
1.477 Views
Preview:
TRANSCRIPT
Encuentro de Seguridad Alimentaria y Nutrición
5º aniversario de la creación de la AESAN
Evaluación de la seguridad y eficacia de cepas probióticas con destino a la alimentación humana.
Probióticos aislados de la leche materna
Julio Boza
Santander
11 Septiembre 2007
Microbiota Intestinal
Hombre
Nº Células 1013
Microbiota
1014
Especies 1 >400
Peso 70 Kg 2 Kg
Cerebro 1.3 Kg
Corazón 0.6 Kg
10% Hombre/90% Bacteria
Microbiota Intestinal: Localización
Localización anatómica nºbacterias/g tejido Principales microorganismos
PIEL *
Frente 2x105
Staphilococcus epidermidis,
Staphilococcus epidermidis,
Axila 2,4x106
Corynebacterum,
Acinetobacter calcoaceticus
Espalda 3,1x102
S.epidermidis, Corynebacterium,
Malassezia furfur
Antebrazo 1x102
Dedos del pie Brevibacterium epidermidis
Folículos capilares Demodex folliculorum
Ingles Acinetobacter calcoaceticus
T. REPIRATORIO
Pulmones y bronquios 0 Esteriles
Fosas nasales 107-10
8S.epidermidis, S. Aureus,
Corynebacterium,Propionibacterium
Nasofaringe 106-10
7Moraxella catarrhalis,
Haemophilus influenzae,Neisseria
Streptococcus spp,
Orofaringe 106-10
7Mycoplasma salivarum,M.orale
Haemophylus parainfluenzae
T. GASTROINTESTINAL
Cavidad oral
Saliva 7x108
Streptococcus salivarius, S,sanguis,
S.mutans,S.mitior,Lactobacillus
Dientes Streptococcus,Lactobacillus
Corinebacterium,Propionibacterium
Streptococcus,filamentosas G+,
Encias Treponema,Haemophilus,Neisseria,
Eikenella
Esofago ? No evidencias de una flora común en
humanos
Estomago y los 2 primeros 1x104
Lactobacillus, Streptococcus,
tercios del I.delagado (Helicobacter pylori)
Lactobacillus,Enterococcus
Ileon 1x108
Enterobacterias(E.coli),Bacteroides,
Veillonella,Clostridium
E.coli,Bacteroides,Bifidobacterium,
Colon 1010
-1012
Peptostreptococcus,Clostridium
Bacillus,Eubacterium,Fusobacterium
Enterococcus
T. UROGENITAL
Uretra distal 1x105
E.coli,Lactobacillus,Staphilococci
Mucosa genital Mycobacterium smegmatis
Vagina entre pubertad y 1x108
Lactobacillus
menopausia Corynebacterium,Gardnerella vaginalis
Peptococcus,E.coli
Vagina antes de pubertad 1x108
Streptococcus,Staphilococcus
y tras menopausia
LECHE MATERNA 1x103-1x10
5Staphylococcus,Streptococcus,
Lactobacillus,Enterococcus
Microbiota Intestinal: Funciones
Hombre
Nº Células 1013Microbiota
1014Especies 1 >400
Peso 70 Kg 2 KgCerebro 1.3 KgCorazón 0.6 Kg
10% Hombre/90% Bacteria
Tienen alguna función?
Microbiota Intestinal: Funciones
Ilja Metchnikoff
““ Desde tiempos inmemoriales, los hombres han asimilado cantidadeDesde tiempos inmemoriales, los hombres han asimilado cantidades s de bacterias de de bacterias de áácido lcido lááctico en forma de productos alimenticios ctico en forma de productos alimenticios --
como leche agria, kefir o col fermentada como leche agria, kefir o col fermentada -- sometidos a un proceso de sometidos a un proceso de fermentacifermentacióón antes de ser consumidos en estado crudo. Con ello, sin n antes de ser consumidos en estado crudo. Con ello, sin
saberlo,han mitigado las nocivas consecuencias del proceso de saberlo,han mitigado las nocivas consecuencias del proceso de putrefacciputrefaccióón en el organismo n en el organismo ““. . (L(L’’immunitimmunitéé dans les maladies dans les maladies
infectiouses)infectiouses)
1902- Los caucasianos vivían más tiempo
Consumo de leches fermentadas
Microbiota Intestinal: Funciones
Ilja Metchnikoff
““ Desde tiempos inmemoriales, los hombres han asimilado cantidadeDesde tiempos inmemoriales, los hombres han asimilado cantidades s de bacterias de de bacterias de áácido lcido lááctico en forma de productos alimenticios ctico en forma de productos alimenticios --
como leche agria, kefir o col fermentada como leche agria, kefir o col fermentada -- sometidos a un proceso de sometidos a un proceso de fermentacifermentacióón antes de ser consumidos en estado crudo. Con ello, sin n antes de ser consumidos en estado crudo. Con ello, sin
saberlo,han mitigado las nocivas consecuencias del proceso de saberlo,han mitigado las nocivas consecuencias del proceso de putrefacciputrefaccióón en el organismo n en el organismo ““. . (L(L’’immunitimmunitéé dans les maladies dans les maladies
infectiouses)infectiouses)
1902- Los caucasianos vivían más tiempo
Consumo de leches fermentadas
Microbiota Intestinal: Funciones
Ilja Metchnikoff
FUNCION DE LA MICROBIOTA
Fisiología de las bacterias comensales
• Función nutritiva
• Función trófica
• Prevención de infecciones
• Inmunomodulación
Protección frente a Infecciones
Enterocito Muco
Fisiología de las bacterias comensales
• Competencia de unión
• Interacciones metabólicas
• Competencia por nutrientes
• Producción de sustancias antimicrobianas
FUNCIÓN INMUNOMODULADORA
Interacción con el Epitelio Intestinal (regulación génica)
Producción metabolitos inmunomoduladores
Inmunoactividad de los componentes bacterianos
El Sistema Inmunitario Intestinal
GALT/NALT:
80% de los linfocitos50% del total de Inmunoglobulinas90% del total de Ig A95-99% de Antígenos extraños
* 10% Hombre/90% bacteria
* 1014 células procariotas
* > 400 especies distintas
* 70.000 genes procariotas
Tiene algún efecto beneficiosopara la salud humana?
Se puede modular?
Flora Intestinal
Probióticos
Probióticos
• Metchnikoff 1902 �consumo leches fermentadas)
• Moro 1900; Beijerinck 1901; Cahn 1901; Cohendy 1906; Tissier 1906) � Infecciones intestinales
• Isaac Carasso (1919)
• Fabricación comercial yogur
• Farmacia y con receta médica
• Prevención y alivio trastornos muy diversos (diarrea, estreñimiento, dispepsia, colitis, colitis ulcerosa, cistitis, dermatitis, etc)
•Vergio (1957) “ probiotika ”
Probiótico
“Live microorganisms which when administered in adequate amounts confer a health benefit on the host”
Probiótico:
Probiótico
- Viable (producto)- Conocido- Cantidad suficiente (caducidad)- Colonización del intestino (digestión)- Efectos beneficiosos
“Live microorganisms which when administered in adequate amounts confer a health benefit on the host”
Efectos beneficiosos
Ampliamente demostrados Diarrea por antibióticos (Clostridium difficile) Diarrea por rotavirus
Diarrea por quimioterapia Diarrea del viajero Estimulación del Sistema Inmunitario Reducción metabolitos tóxicos en colon
Con evidencias Infecciones por Helicobacter pylori u otras
Reducción síntomas alérgicos Prevención de cáncer Absorción de minerales (Ca ) Producción de enzimas (ß-galactosidasa)
Probióticos
Mercado
Según el informe de Frost and Sullivan (2003) el valor del mercado de prebióticos en EEUU está cifrado para el 2003 en 143.9 millones de $, mientras que en Europa sería de 40.3 millones de $ con una proyección muy alta alcanzando valores de más de 400 millones de $ en EEUU para el 2010.
Mercado
Selección de bacterias probióticas
Criterios fundamentales:
• Correcta identificación al nivel de cepa
• Capacidad para llegar viable y en nºsuficiente a su lugar de acción
• Seguridad
• Efectividad real mediante ensayos clínicos
Selección de bacterias probióticas
I+D, regulación, producción y comercialización
Elementos clave
• Seguridad
• Eficacia
• Estabilidad
Seguridad (antecedentes)
• Normativa aplicable al empleo de cultivos microbianos varía, en el caso de que exista, dependiendo de los países.
• EFSA ha indicado la necesidad de legislar la utilización de microorganismos en alimentos destinados al consumo humano.
• En general, se han clasificado como suplementos dietéticos y en la fabricante no debe notificar la introducción de nuevas cepas a la autoridad relevante, con la excepción de Dinamarca.
• Estatuto danés (BEK nr. 282 af 19/4/2000) dossier ha de incluir estudios microbiológicos y toxicológicos, no especificando cuales.
• AFSSA (2002) propone un esquema de evaluación de seguridad para microorganismos a emplear en el sector agroalimentario. Indica estudios toxicológicos específicos, si fuesen necesarios.
Seguridad (antecedentes)
• Regulación Europea de Nuevos Alimentos (258/97 UE) incluye “alimentos o ingredientes alimentarios que contenga, consistan o se aíslen de microorganismos modificados genéticamente y también todos los que contengan, consistan o se aíslen de microorganismos.
•Aditivos y adyuvantes no entran en el ámbito de dicha regulación
• Uso de microorganismos como aditivos y adyuvantes es ambiguo.
• Interpretación literal (258/97 UE) “cualquier cepa no comercializada antes de 1997 debería ser o haber sido sometida a un procedimiento (duro y costoso) para evaluar su seguridad”
QPS: Presunción de seguridad cualificada
2002
Ventajas:
• Marco legal unificado UE
• Evitarían o reducirían pruebas innecesarias y/o repetitivas para microorganismos con larga tradición de uso favoreciendo el desarrollo de nuevos productos
• Evaluación seguridad limitada a aspectos relevantes dependiendo del organismo en cuestión
QPS: Presunción de seguridad cualificada
2003: EFSA responsable evaluación seguridad alimentos
2003: EFSA responsable evaluación seguridad alimentos
Seguridad
Seguridad
Seguridad
Seguridad
Seguridad
Seguridad
Seguridad
Seguridad
QPS
QPS
Seguridad
Evaluación1.- Género, especie, cepa
• Técnicas tradicionales:
• medios selectivos
• patrones de fermentación específicos
• Técnicas moleculares: tests fenotípicos y genéticos
• fracción 16s RNA
• presente en todas las células
• se detecta con facilidad
• posee numerosas regiones variables
• existencia ���� secuencias (> 100.000 en bases de datos (http://rdp.cme. msu.edu/html)
EvaluaciónTipaje de cepas
Amplificación al azar de DNA polimórfico (RAPD)
- Perfiles eelectroforéticos que varían según el polimorfismo (huella dactilar característica)
- Cómoda, rápida, poca cantidad DNA, no presupone concimientos previos secuencia, se pudendistinguir fácil, rápida y simultaneamente muchos organismos
- Muy sensible a condiciones amplificación
EvaluaciónTipaje de cepas
Electroforesis en campo de pulso (PFGE)
2. Tests in vitro potencial probiótico
• Resistencia acidez gátrica
• Resistencia sales biliares
• Adherencia al mucus y/o células epiteliales
• Actividad antimicrobiana frente a patógenos
• Capacidad de reducir adhesión patógenos a cel. epiteliales
• Actividad hidrolítica frente a sales biliares
• Perfil inmunológico
Evaluación
Seguridad
• Determinar las propiedades intrinsecas de bacterias y cepas (factores de adhesión, degradación de mucinas, resistencia a antibióticos, transferencia de plásmidos, actividades enzimáticas no deseables, activ hemolítica, producción aminas biógenas, producción de D-láctico, etc).
• Determinar los efectos de los metabolitos producidos por las bacterias.
• Estudiar la capacidad infectiva de células humanas (in vitro) y de animales inmunocomprometidos.
•Determinar la toxicidad aguda tras la ingestión de grandes cantidades de bacteria.
•Determinar sus efectos beneficiosos (dosis-respuesta) en modelos animales sanos y de enfermedad inducida.
• Estudiar la aparición de efectos secundarios en ensayos de intervención en voluntarios o pacientes.
Seguridad
Especie DL50 (g/kg peso)Streptococcus faecium AD1050 >6.6
Streptococcus equinus >6.4
Lactobacillus fermentum AD002 >6.6
Lactobacillus salivarius AD0001 >6.5
Lactobacillus GG (ATCC 53103) >6.0
Lactobacillus helveticus >6.0
Lactobacillus bulgaricus >6.0
Bifidobacterium longum 25
Donohue et al. 1998
• Fase 1: Seguridad
• Fase 2: Eficacia-doble ciego (efectos adversos, síntomatología, signos, well-being, reducción de riesgo de enfermedades, recuperación de enfermedades, etc)
• Fase 3: Efectividad en comparación con terapia estándar
• Fase 4: Vigilancia
- Repetir estudios en centros independientes.
- Publicación resultados en revistas científicas
Eficacia (Ensayos humanos)
Health claims
• Género, especie y cepa
• Número mínimo de viables de cada cepa a final de la vidad del producto
• Porción alimento que contenga la dosis efectiva del probiótico para que produzca el efecto beneficioso
• Alegación salud específica
• Condiciones almacenamiento
• Detalles de la compañía para información al consumidor
Alegaciones de salud y etiquetado
top related