aislamiento 2015 final

8/15/2019 Aislamiento 2015 Final

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AISLAMIENTO DE A PARTIR DE UNA MUESTRA DE CARNE DE RES CON MALA HIGIENE

ISOLATION OF Streptococcus faecalis FROM BEEF WITH POOR HYGIENE

1Martínez Ramírez Yoselis Daniela – 1Ortega Martínez Yodis Yohana .

RESUMENCo el o!"eti#o $e e%plear los cooci%ietos a$&uiri$os a lo lar'o $el curso $e Micro!iolo'(aGeeral) se tra!a"* e el aisla%ieto $e la !acteria Streptococcus faecalis a partir $e care $e res+Para la o!teci* $e la %uestra utili,a$a e el aisla%ieto se to%a -. 'ra%os $e care $e res &ueso $ilui$os e /00 %ililitros $e a'ua peptoa) co el fi $e eri&uecer la %uestra 1 per%itir laproliferaci* $e la !acteria $esea$a) posterior%ete se icu!a a 234C por -5 6oras para as( o!teer ua %a1or 6o%o'ei,aci* $e la %uestra7 para aislar Streptococcus faecalis se proce$e a pre8eri&uecer la %uestra e cal$o Brai Heart Ifusio 9BHI: 1 cal$o Nutriti#o &ue se icu!a a -. 1234C por -5 6oras+ Se to%a ioculo $el cal$o BHI 1 se sie%!ra e A'ar Mueller Hito e i*culos$e A'ar Nutriti#o so se%!ra$os e A'ar Sa're) lue'o so icu!a$o a -. 1 234C por -5 6oras+Preset;$ose creci%ieto $e Streptococcus faecalis e la %uestra $e care $e res) lo cual see#i$eci* a tra#<s $e coloias $e color !lacu,co) su %orfolo'(a se lo'r* cofir%ar por la aplicaci*$e la tici* $e Gra% o!ser#;$ose co%o coco Gra%8positi#o+

Palabras claves: Streptococcus faecalis) a'ua peptoa) cal$o BHI) cal$o Nutriti#o) A'ar Muller Hito) A'ar Sa're) tici* $e Gra%+

ABSTRACT

Wit6 t6e o!"ecti#e of usi' t6e =o>le$'e 'aie$ t6rou'6out t6e course of Geeral Micro!iolo'1) >or=o t6e isolatio of t6e !acteria Streptococcus faecalis fro% !eef+ To o!tai a sa%ple use$ i t6eisulatio >ill ta=e -. 'ra%s of !eef t6at are $ilute$ i --. %l of >ater peptoe) I or$er to eric6 t6esa%ple a$ allo> t6e proliferatio of t6e $esire$ !acteria) t6e icu!ate$ at 23 4C for -5 6ours too!tai a 'reater 6o%o'ei,atio of t6e sa%ple7 to isolate Streptococcus faecalis is applica!le to pre8eric6 t6e sa%ple i !rot6 !rai 6eart ifusio 9BHI: a$ Nutriet !rot6 t6at is icu!ate$ at -. a$ 234C for -5 6ours+ Ioculu% are ta=e fro% t6e !rot6 BHI a$ plate$ o Mueller Hito A'ar a$ioculu% Nutriet a'ar a'ar are plate$ i !loo$ are t6e icu!ate$ at -. a$ 23 4C for -5 6ours+Preseti' 'ro>t6 of Streptococcus faecalis i t6e sa%ple !eef) >6ic6 >as pro#e$ t6rou'6 coloies of >6itis6 color) t6eir %orp6olo'1 >as a!le to cofir% !1 t6e applicatio of t6e Gra% stai o!ser#e$ ascoco Gra%8positi#e+

Keywors? Streptococcus faecalis) peptoe >ater) BHI !rot6) Nutritious !rot6) Muller Hito A'ar)Bloo$ A'ar) Gra% stai+

1 Estudiante de Ingeniería de Alimentos, IV semestre, Universidad de Córdoba, Facultad

de Ingenierías, Programa de Ingeniería de Alimentos, microbiología general, Berástegui

Córdoba!

1



INTRODUCCI!NLa care es el te"i$o ai%al) pricipal%ete%uscular) &ue se cosu%e co%o ali%eto+ Setrata $e ua clasificaci* colo&uial 1 co%ercial&ue s*lo se aplica a ai%ales terrestres

or%al%ete #erte!ra$os? %a%(feros) a#es 1reptiles) pues) a pesar $e po$er aplicarse tal$efiici* a los ai%ales %arios) estos etrae la cate'or(a $e pesca$o) especial%ete lospeces )los crust;ceos) %oluscos 1 otros 'rupossuele reci!ir el o%!re $e %arisco+ M;s all;$e su correcta clasificaci* !iol*'ica) otrosai%ales) co%o los %a%(feros) se 6acosi$era$o a #eces care 1 a #eces pesca$o+@es$e el puto $e #ista utricioal) la care esua fuete 6a!itual $e prote(as) 'rasas 1%ierales e la $ieta 6u%aa+ @e to$os los

ali%etos &ue se o!tiee $e los ai%ales 1platas) la care es el &ue %a1or) #aloraci* 1apreciacio alca,a e los %erca$os 1)para$*"ica%ete) ta%!i< es uo $e losali%etos %;s e#ita$os 1 &ue %;s pol<%icassuscita+La especie Streptococcus faecalis es ua!acteria Gra%8positi#a) &ue for%a parte $e laflora or%al $el tracto 'astroitestial) e eltero 1 e la #a'ia $e al'uos %a%(feros)pue$e ta%!i< ser ecotra$os e suelo)co%i$a) a'ua) platas) ai%ales) p;"aros e

isectos+ Ta%!i< estos %icroor'ais%ospue$e 6allarse $e for%a atural e preseciao ausecia $e oi'eo el Streptococcus es uor'ais%o facultati#o aaero!io) prefiere usar o('eo) au&ue so!re#i#e !ie e suausecia+ E. faecalis pue$e causar ifeccioesco%pro%eti$as e 6u%aos) especial%ete ea%!iete $e 6ospital+ La eistecia $eEnterococcus se potecia por&ue 6a tei$o la6a!ili$a$ $e a$&uirir resistecia ate to$os losati!i*ticos e uso+El 6;!itat or%al $e Streptococcus faecalis es

el tu!o $i'esti#o $e ai%ales $e sa'recaliete+ So i$ica$ores $e cota%iaci*fecal) por lo &ue su presecia e los ali%etosi$ica falta $e 6i'iee o $efectuosasco$icioes $e coser#aci*) ecepto eali%etos e los &ue iter#iee co%o flora!acteriaa atural $e procesos fer%etati#os)co%o es el caso $e &uesos) e%!uti$os cru$ose icluso pro$uctos c;ricos+

So %u1 resistetes a co$icioes a$#ersas9co'elaci*) $esecaci*) trata%ieto t<r%ico)etc+: por lo &ue so !ueos i$ica$ores para#alorar las co$icioes 6i'i<icas 1 $ecoser#aci* $e los ali%etos co'ela$os 1

$eseca$os+

MATERIALES " METODOS

Para este aisla%ieto se us* el la!oratorio $e%icro!iolo'(a $e la ui#ersi$a$ $e C*r$o!a ela se$e $e Ber;ste'ui) para po$er reali,ar esteasila%ieto se tu#o e cueta los %ateriales 1e&uipos $ispoi!les para la o!teci* $eStreptococcus faecalis a partir $e ua %uestra$e care $e res co %ala 6i'iee+

Ma#er$ales y e%&$'os

-. 'r $e care $e res

Esp;tula

Mortero

Bala,a aal(tica

Asa re$o$a

Asa e puta

Mec6ero

Gra$illa

Portao!"etos

Al'o$* Alco6ol

Colorate cristal #ioleta

Colorate lu'ol

Alco6ol acetoa

Safraia $e Gra%

Frasco co a'ua $estila$a

A'ua peptoa

Cal$o Nutriti#o

Cal$o BHI

A'ar sa're

A'ar Mueller Hito Per*i$o $e 6i$ro'eo

Me$io IA

Me$io TSI

Me$io SIM

Icu!a$ora

Microscopio

"



M(#oos

)* Recolecc$+, e la car,e e res co,-ala .$/$e,e: Para la recolecci* 1o!teci* $e la %uestra $eStreptococcus faecalis

a partir $ecare $e res os $iri'i%os al %erca$o

p!lico u!ica$o e el %uicipio $eci<a'a $e oro e el $eparta%eto $eC*r$o!a+ Se esco'i* este lu'ar $e!i$oa las co$icioes a%!ietales 1saitarias+

0* Pre'arac$+, e la -&es#ra: Elaisla%ieto $e

Streptococcus faecalisse reali,ara a partir $e ua %uestra $ecare $e res co %ala 6i'iee ) $e!i$oa &ue esta posee altos cotei$os $eprote(as 1 este %icroor'ais%o pue$e

reali,ar sus procesos %eta!*licos eesta) por esta ra,* es posi!le 6allarlae esa ,oa7 $espu<s $e seleccioa$olos 'ra%os $e care &ue se aali,araes lle#a$o al la!oratorio $e%icro!iolo'(a $e la ui#ersi$a$ $eC*r$o!a 1 se pesa -. 'r $e este) coa1u$a $e u %ortero pre#ia%ete$esifecta$o se trat* $e reali,ar utritura$o para as( po$er teer ua%a1or 6o%o'ei,aci* $e la care+ Sea$icioa la %uestra e a'ua peptoa

para eri&uecer la %uestra 1 per%itir laproliferaci* $e la !acteria $esea$a)$espu<s se so%eti* a a'itaci* 1 eslle#a$o a icu!aci* por -5 6oras a23DC para as( o!teer ua %a1or 6o%o'ei,aci* $e la %uestra+

1* E,r$%&ec$-$e,#o e la -&es#ra: Alfiali,ar el per(o$o $e icu!aci* seiocula la %uestra e $os cal$os BHI9Ifusio Heart Brai: 1 $os cal$osNutriti#o) los cuales posterior%ete$e!e icu!arse) u cal$o $e ca$a ca"aa -. 1 23 4C $urate -5 6oras+

2* S$e-bra e, -e$os s+l$os: @espu<s$el perio$o $e icu!aci*) sese%!raro %icroor'ais%os) to%a$ou iocul* $el cal$o BHI a -.4C 1 234C&ue posterior%ete so se%!ra$os e$os ca"as $e A'ar Mueller Hito loscuales so icu!a$os a -.4C 1 234C

por -5 6oras) %ietras &ue u iocul*$e cal$o Nutriti#o a -.4C 1 234C esse%!ra$o e $os ca"as $e A'ar sa're&ue so icu!a$as a -.4C 1 234C por -5 6oras+ Se esco'iero estos $os%e$ios 1a &ue estos so %e$ioseri&ueci$os 1 los %;s aptos para el

aisla%ieto e i$etificaci* $e este'<ero !acteriao+

3* Ie,#$4$cac$+, -or4ol+/$ca?Posterior%ete se to%a coloias $el

A'ar Mueller Hito a -. 1 234C parareali,ar la tici* $e Gra% 1 i$etificar %orfol*'ica%ete el Streptococcusfaecalis.

5* Pr&ebas b$o%&6-$cas: E esta etapa

$el proce$i%ieto parti%os $e lascoloias $esarrolla$as e el A'ar Mueller Hito 1 a'ar sa're a -. 1234C para e#i$eciar la presecia $eStreptococcus faecalis se reali,aro lasprue!as !io&u(%icas $e catalasa parai$etificar la presecia $e la e,i%acatalasa7 TSI 1 IA &ue $eter%ia lacapaci$a$ $e la !acteria $e atacar u6i$rato $e car!oo especifico)icorpora$o e %e$io $e creci%ieto!;sico) co pro$ucci* o o $e 'ases)

"uto co la posi!le for%aci* $e H-S ei$ica$or $e pH? ro"o $e feol+ I$ol$eter%ia la capaci$a$ $e ua !acteria$e $es$o!lar el I$ol $e la %ol<cula $etript*fao 1 Motili$a$ 1 H-S para as(po$er o!ser#ar la %o#ili$a$ $el%icroor'ais%o) 'racias a la !a"acocetraci* $e a'ar) lo cual osi$ica la presecia $e fla'elos) por otrola$o po$er $eter%iar si se 6a li!era$oH-S por la acci* e,i%;tico $e losa%io;ci$os &ue cotiee a,ufre)pro$ucie$o ua reacci* #isi!le $ecolor e'ro+ tu!o $e ca$a prue!a esicu!a$o a -.4C 1 234C por -5 6oras+

RESULTADOS " DISCUSI!N

Los resulta$os o!tei$os $espu<s $e lapreparaci* $e la %uestra e#i$eciaro ua%a1or proliferaci* $e la !acteria $esea$a

#



'racias al eri&ueci%ieto $e la care $e resco a'ua peptoa la cual es u %e$ioselecti#o) &ue proporcioa utrietesecesarios para el $esarrollo $e Streptococcusfaecalis.

Co el fi $e o!teer ua %a1or

6o%o'ei,aci* se lle#* a ca!o u pre8eri&ueci%ieto $e la %uestra 1a eri&ueci$autili,a$o los cal$os BHI &ue aportautrietes &ue proporcioa u a$ecua$o$esarrollo %icro!iao+ La ifusi* $e cere!ro$e terera) la ifusi* $e cora,* #acuo 1 lapeptoa) so ua fuete $e car!oo)itr*'eo) 1 #ita%ias+ La 'lucosa es el 6i$rato$e car!oo fer%eta!le) el cloruro $e so$io%atiee el !alace os%*tico 1 el fosfato$is*$ico otor'a capaci$a$ !uffer 9$escri!ecuato aci$o o !ase pue$e a!sor!er ua

sustacia si %o$ificar su pH:+E tato el cal$o Nutriti#o es utili,a$o para pre8eri&ueci%ieto 1a &ue per%ite recuperar c<lulas $aa$as) $iluir %eta!olitos t*icos 1sustacias i6i!itorias) es u %e$io oselecti#o) cotiee pluripeptoa 1 etracto $ecare &ue costitu1e la fuete $e car!oo 1itr*'eo ecesarios para el a$ecua$o$esarrollo !acteriao+ Se e#i$ecio elcreci%ieto $e la !acteria e aaero!iosis &uees propio $e este '<ero !acteriao+

Al reali,ar la sie%!ra $e uestra %uestrapre#ia%ete eri&ueci$a 1 posterior%ete pre8eri&ueci$a e los $os tipos $e A'ar se pu$oo!ser#ar &ue e el A'ar Mueller Hito sepreset* creci%ieto co coloiasre$o$ea$as $e color !lacu,co propios $eStreptococcus faecalis e %a1or cocetraci*a te%peratura $e 234C %ietras &ue a -.4C6u!o creci%ieto pero co %eos coloiasesto se $e!e a &ue la te%peratura *pti%a $ecreci%ieto $e este %icroor'ais%o es $e2.DC o o!state) se 6a o!ser#a$o creci%ieto

etre /0DC 1 5.DC por esta ra,* ta%!i<o!ser#a%os creci%ieto a -.4C+Se e#i$ecio i'ual%ete e a'ar sa're ucreci%ieto a a%!os ra'os $e te%peratura$e!i$o a &ue este %e$io es til tato para elaisla%ieto co%o para culti#os $e%icroor'ais%os aero!ios 1 aaero!iosutricioal%ete ei'etes 1 la ifusi* $e%sculo $e cora,* 1 la peptoa) otor'a al%e$io u alto #alor utriti#o) &ue per%ite el

creci%ieto $e ua 'ra #arie$a$ $e%icroor'ais%os+

Reali,a$o tici* $e Gra% para lai$etificaci* %orfol*'ica $e Streptococcusfaecalis se to%aro coloias $e la ca"a $eMueller Hito a -. 1 234C 1 a'ar sa're a -.

1 234C o!ser#;$ose !acterias Gra%8positi#a$e color #ioleta 1 co for%as $e cocos)caracter(sticas fu$a%etales $e losStreptococcus faecalis.

Las prue!as !io&u(%icas &ue se utili,aro eel la!oratorio para a1u$ar a la i$etificaci* $ela !acteria e estu$io fuero catalasa $a$oco%o resulta$o positi#o co frotis $e coloias a-. 1 234C $e!i$o a la for%aci* i%e$iata $e!ur!u"as+ E tato a la prue!a $e TSIo!ser#a%os a te%peratura $e -.4C

ee'reci%ieto $el %e$io por H-S 1 a 234Cse o!ser#* el pico $e flauta a%arillo por fer%etaci* $e sacarosa 1 lactosa eaero!iosis 1 ee'reci%ieto $el %e$io por H-S e profu$i$a$) e IA a te%peratura $e-.4C e el pico $e flauta se o!ser#* AcAca%arilloa%arillo e el pico flauta 6u!ofer%etaci* $e lactosa e aero!iosis 1 eprofu$i$a$ e aaero!iosis se fer%eto'lucosa 1 a 234C se o!ser#* ee'reci%ieto$el %e$io por H-S) e la prue!a $e I$ol seo!ser#* la for%aci* $el aillo ro"o lue'o $e

a're'a$o el reacti#o $e =o#acs a -. 1 234Crespecti#a%ete) e tato Motili$a$ 1 H-S seo!ser#* ee'reci%ieto $el %e$io a -. 1234C+

CONCLUSIONES " RECOMENDACIONES

Teie$o e cueta los resulta$os o!tei$os$e las sie%!ras) las prue!as !io&u(%icas 1tici* $e Gra%) se pue$e iferir &ue se aisl*Streptococcus faecalis a partir $e ua %uestra$e care $e res 7 esto se pu$o $e$ucir $e!i$o

a &ue el %icroor'ais%o arro"* resulta$ostales co%o crecer e aaero!iosis) for%ar coloias re$o$ea$as $e color !lacu,co)o!ser#;$ose %;s a!u$acia $e coloias ate%peratura $e 234C &ue $e -.4C por&ue late%peratura opti%a $e la !acteria es $e 2.4C 1o!ser#ar su %orfolo'(a co%o coco Gra%8positi#o) to$o estas $escripcioescorrespo$e a este '<ero $e !acterias por lo

$



&ue se $ice &ue se aisl* el Streptococcusfaecalis a partir $e ua %uestra $e care $eres co %ala 6i'iee+

la $esifecci* $el sitio $o$e se tra!a"* fuefu$a%etal para lle'ar a uestros resulta$os1 e#itar el creci%ieto $e %icroor'ais%os

i$esea$os 1 las posi!les cota%iacioes eel %e$io) a$e%;s se tu#o u a$ecua$o%ae"o $e las te%peraturas $e icu!aci* ela %uestra+ @e tal for%a &ue se pu$iera lle#ar el proce$i%ieto $e %aera or$ea$a) co elprop*sito $e aislar el %icroor'ais%o $esea$o+

RE8ERENCIA

6ttp?>>>+actao$otolo'ica+co%e$icio

es-00/eterococcusfaecalis$ietesfracasotrata%ietoe$o$otico+asp

6ttp?>>>+!ritaiala!+co%pro$uctos2J

26o"atecicaes+p$f

6ttp?!ritaiala!+co%+aresppro$uctos

!0-cere!corifusa'ar+6t%

6ttp?>>>+!ritaiala!+co%+aresppro$u

ctos!0-utriti#ocal$o+6t%

6ttp?>>>+!ritaiala!+co%pro$uctos22

.6o"atecicaes+p$f

6ttp?>>>+!ritaiala!+co%+aresppro$u

ctos!0-sa'rea'ar!ase+6t%

%

http://www.actaodontologica.com/ediciones/2009/1/enterococcus_faecalis_dientes_fracaso_tratamiento_endodontico.asp




http://www.britanialab.com/productos/363_hoja_tecnica_es.pdf


http://britanialab.com.ar/esp/productos/b02/cerebcorinfusagar.htm


http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/nutritivocaldo.htm




http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/sangreagarbase.htm

















ANE9OS

TABLA DE RESULTADOS DE PRUEBAS BIOU;MICAS

PRUEBA RESULTADO DE TEOR;A RESULTADOS OBTENIDOS

TEMPERATURA 03<C TEMPERATURA 1=<CCa#alasa Pr&eba >?@ for%aci*

i%e$iata $e !ur!u"as+Pr&eba >@ o sepro$uce !ur!u"as+

Pr&eba >?@ for%aci*

i%e$iata $e !ur!u"as+

Pr&eba >?@ for%aci*

i%e$iata $e !ur!u"as+

TSI AlcA: rooa-ar$llo:fer%etaci* $e la 'lucosa+

AAlc: a-ar$lloroo:fer%etaci* $e la lactosa 1

sacarosa+

AA: a-ar$lloa-ar$llo:fer%etaci* $e los tres

a,ucares+

AlcAlc: rooroo: i'ua

fer%etaci*+

Gas o ,o /as: for%aci* $e

!ur!u"as 1 ro%pi%ieto $el

%e$io+

Prese,c$a o a&se,c$a e H0S:ee'reci%ieto $el %e$io+

Prese,c$a o a&se,c$ae H0S

ee'reci%ieto $el

%e$io+

AAlc: a-ar$lloroo:fer%etaci* $e la lactosa 1

sacarosa+

Prese,c$a o a&se,c$a eH0S: ee'reci%ieto $el

%e$io+

KIA AlcA: v$,oa-ar$llo:fer%etaci* $e la 'lucosa+

AA: a-arr$lloa-ar$llo:fer%etaci* $e los $os

a,ucares+

AlcAlc: v$,ov$,o: o 6a1

fer%etaci*+

Gas o ,o /as: for%aci* $e

!ur!u"as 1 ro%pi%ieto $el

%e$io+Prese,c$a o a&se,c$a e H0S:ee'reci%ieto $el %e$io+

AA: a-ar$lloa-ar$llofer%etaci* $e los

$os a,ucares+

Prese,c$a o a&se,c$a eH0S ee'reci%ieto $el

%e$io+

INDOL Pr&eba >?@ aillo ro"o e la

superficie

Pr&eba >@ o se pro$uce color)

se tora a%arillo por el reacti#o+

Pr&eba >?@ u color

aara"a$o e la superficie $el

Pr&eba >?@ aillo ro"o

e la superficie

Pr&eba >?@ aillo ro"o e la

superficie

&



%e$io+

Mo#$l$ay H0S

Pr&eba >?@ los %icroor'ais%os

%*#iles %i'ra $e la l(ea $e

sie%!ra 1 se $ifu$e e el

%e$io) ee'reci%ieto $el

%e$io para el H-S 1 for%aci*$e aillo ro"o e el caso $el

i$ol+

Pr&eba >@ crec$-$e,#o solo e

la l(ea $e sie%!ra) o se

pro$uce H-S i i$ol+

Pr&eba >?@Ee'reci%ieto $el

%e$io para el H-S

Pr&eba >?@ Ee'reci%ieto

$el %e$io para el H-S

REGISTRO 8OTOGRA8ICO

I-a/e, N<) Muestra $e care $e res lle#a$a 1pesa$a e el la!oratorio+

I-a/e, N<0 -. 'ra%os $e care $e res

tritura$o+

I-a/e, N<1 Pre-eri&ueci%ieto $e la %uestra

$e care $e res e a'ua peptoa $espu<s $e

icu!aci* por -5 6oras+

I-a/e, N<2 Eri&ueci%ieto e cal$o BHI 1Nutriti#o $espu<s $e icu!aci* a -.4C+Eri&ueci%ieto e cal$o BHI 1 Nutriti#o$espu<s $e icu!aci* a 234C+

I-a/e, N<3 Sie%!ra $e ioculo $e cal$oNutriti#o e A'ar sa're $espu<s $e icu!a$oa -.4C+

'



I-a/e, N<5 Sie%!ra $e ioculo $e cal$oNutriti#o e A'ar sa're $espu<s $e icu!a$oa 234C+

I-a/e, N<= Sie%!ra $e ioculo $e cal$o BHIe A'ar Mueller Hito $espu<s $e icu!a$o a-.4C+

I-a/e, N<Sie%!ra $e ioculo $e cal$o BHIe A'ar Mueller Hito $espu<s $e icu!a$o a234C+

I-a/e, N< Prue!a !io&u(%ica $e Catalasa apartir $e frotis $e A'ar Mueller Hito a -.4C+

I-a/e, N<)FPrue!a !io&u(%ica $e Catalasa apartir $e frotis $e A'ar Mueller Hito a 234C+

(



I-a/e, N<))Prue!a !io&u(%ica $e Motili$a$ 1H-S) TSI 1 IA $espu<s $e icu!aci* a -.4C+

I-a/e, N<)0 Prue!a !io&u(%ica $e IA) TSI 1Motili$a$ 1 H-S) $espu<s $e icu!aci* a 234C+

I-a/e, N<)1 Prue!a !io&u(%ica $e I$ol$espu<s $e icu!aci* a -.4C 1 a're'a$o elreacti#o $e =o#acs+

I-a/e, N<)2 Prue!a !io&u(%ica $e I$ol$espu<s $e icu!aci* a 234C 1 a're'a$o elreacti#o $e =o#acs+

I-a/e, N< )3 Ticio $e Gra% a partir $efrotis $e A'ar Mueller Hito a -. 4C+

)



I-a/e, N< )5 Ticio $e Gra% a partir $efrotis $e A'ar Mueller Hito a 23 4C+

1*

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