Milk Plate Count Agar

DM475. Un medio nutriente enriquecido con slidos deleche para la enumeracin de bacterias viables en lechey otros productos lcteos.

Contenido: Ver etiqueta del envase.

Composicin*

Concentracin delmedio:

Enzima casena hidrolizada 5.0g/litroExtracto de levadura 2.5g/litroD-glucosa 1.0g/litroLeche desnatada en polvo 1.0g/litroAgar 10.0g/litro

pH final: 7.2 0.2Almacenamiento y caducidadTodos los contenedores deben ser almacenados biencerrados en un lugar seco a 25C o por debajo hasta lafecha de caducidad mostrada en la etiqueta del envase.Algunos medios pueden requerir almacenamiento a 2-8C, referirse a la etiqueta del envase.PrecaucionesExclusivamente para uso diagnstico in vitro. Respetarlas precauciones de seguridad y utilizar tcnicasaspticas. Debe ser utilizado solo por personal delaboratorio cualificado y con experiencia. Antes deldesecho, esterilizar todo el material biolgico. Referirse ala hoja de seguridad del producto (disponible si serequiere o a travs de la pgina web de MAST).

Materiales requeridos pero no proporcionadosAccesorios y productos para anlisis microbiolgico yequipos como por ejemplo: lazos, suplementos selectivosMAST, hisopos, palillos aplicadores, incineradores eincubadores, etc.... as como reagentes bioqumicos yaditivos como sangre).

Procedimiento1. Referirse a la etiqueta del envase para cantidades y

volmenes requeridos. Preparar MAST Milk PlateCount Agar (DM475) suspendiendo el polvo en aguadestilada o desionizada. Para los sobres del envase,disolver el contenido entero del sobre en el volumenmostrado en la etiqueta.

2. Revolver para mezclar y llevar a ebullicin hasta quese disuelva completamente.

3. Mezclar bien y distribuir en los contenedores finalesadecuados.

4. Autoclave a 121C (15 p.s.i.) durante 15 minutos.5. Preparar diluciones de leche de 1/10, 1/100, y

1/1,000 en 1/4- solucin concentrada de Ringer.6. Pipetear 1ml de cada dilucin, aspticamente, en

placas Petri separadas.7. Aadir 10ml del Milk Agar lquido, enfriado a 45C a

cada plato y mezclar uniformemente usando una

combinacin de movimientos rpidos hacia delante yatrs que duren entre 5-10 segundos.

8. Dejar las placas reposar durante una hora y luegotransferirlas al incubador.

9. De modo alternativo para la tcnica de reparto,donde 1ml de la solucin de leche se reparte sobre lasuperficie de la placa, verter directamente en losplatos Petri.

10. Incubar las placas en posicin invertida durante dosdas a 35C o tres das a 30C.(Cantidades mayoresque sean apreciables pueden ser obtenidas despusde una incubacin a 22C y 30C ms que a 35C)

Interpretacin de resultadosDespus de la incubacin seleccionar las placas quecontienen entre 10-300 colonias y expresar comocolonias por ml de producto examinado.Las colonias proteolticas psicotrpicas pueden seraumentadas inundando las placas con una solucin decido hidroclrico al 1% o cido actico al 10%. Retirar elexceso de solucin cida y contar las colonias que estnrodeadas por zonas claras.

Control de calidadComprobar si hay signos de deterioro. Se recomiendaque el control de calidad se lleve a cabo con al menos unmicroorganismo para demostrar una reaccin esperada.No usar el producto si el resultado con el microorganismode control es incorrecto.La lista de abajo ilustra el comportamiento de unavariedad de cepas de control que pueden ser fcilmenteobtenidas por el usuario final.

Microorganismos ResultadoLactococcus lactisNCTC 662

Crecimiento

Escherichia coliATCC 11775

Crecimiento

Enterococcus faecalisATCC 19433

Crecimiento

ReferenciasBibliografa disponible si se requiere.

IFU459 MM 10/06 V1MAST es una marca registrada.

ATCC es una marca registrada de la AmericanType Culture Collection, Manassas, Virginia, USA

*La formulacin puede cambiar para seguir los criterios de actuacin