28708976 tabla de agares diferenciales[1]
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Nombre Agar Diferencial o Selectivo
Composición Fundamento
Staphilococcus
Aureus
Gram (+)
Agar Sal y Manitol
Fórmula (en gramos por litro)
Extracto de carne 1.0
Pluripeptona 10.0
d-Manitol 10.0
Cloruro de sodio 75.0
Agar 15.0
Rojo de fenol 0.025
Una alta concentración de sal promueve el crecimiento de algunos organismos mientras inhibe el crecimiento de otros. AMS es un medio diferencial porque contiene el azúcar manitol y el indicador de pH rojo de fenol. Los organismos que pueden fermentar el manitol liberan subproductos ácidos, que causan un cambio de color. El rojo de fenol presenta un color rojo cereza por arriba de pH 8.5, un color amarillo rojizo desde un pH 6.9 a 8.5, y un amarillo brillante por debajo de un pH de 6.9. Aunque tanto el Staphylococcus epidermidis y Staphylococcus aureus puede tolerar el alto contenido de sal en el AMS, solamente S. aureus puede fermentar el manitol, causando que el rojo de fenol vire al amarillo.
Microorganismos Crecimiento Características de las colonias
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Excelente Amarilla
Staphylococcus epidermidis ATCC
14990 Bueno Roja
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido Inhibido
Klebsiella pneumoniae ATCC
700603 Inhibido Inhibido
Salmonella spp.
Gram (-)
Agar Verde
Brillante
Fórmula (en gramos por litro)
Pluripeptona 10.0
Extracto de levadura 3.0
Cloruro de sodio 5.0
Lactosa 10.0
Sacarosa 10.0
Rojo fenol 0.08
Medio de enriquecimiento altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella spp., En el medio de cultivo, la pluripeptona y el extracto de levadura, constituyen la fuente de nitrógeno, vitaminas y minerales. La lactosa y la sacarosa son los hidratos de carbono fermentables, el rojo fenol es el indicador de pH, que vira al amarillo cuando hay producción de ácido a partir de la fermentación de azúcares, el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el verde brillante actúa como agente selectivo.}
Microorganismos Características de las colonias
Escherichia coli ATCC 25922 Amarillo-verdosas sobre fondo amarillento
Salmonella enteritidis ATCC 13076 Rosas, blancas o transparentes sobre fondo rojo
Salmonella typhi Crecimiento inhibido
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Rosas, blancas o transparentes sobre fondo rojo
Shigella flexneri. ATCC 12022 Crecimiento inhibido
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Crecimiento inhibido
Escherichia Coli
Gram (-)
Agar de Acetato
Fórmula (en gramos por litro)
Acetato de sodio 2.0
Sulfato de magnesio 0.2
Cloruro de sodio 5.0
Fosfato de amonio 1.0
Fosfato dipotásico 1.0
Azul de bromotimol 0.08
Agar 14.8
Es un medio de cultivo que contiene una mezcla de sales en la cual, el acetato de sodio es la única fuente de carbono. No posee azúcares ni tampoco inhibidores del crecimiento bacteriano Un microorganismo que es capaz de usar acetato como su única fuente de carbono, utiliza también las sales de amonio como su única fuente de nitrógeno. Debido a la utilización de sales de amonio, se libera amoníaco, que alcaliniza el medio, y esto produce un viraje del indicador azul de bromotimol del color verde al color azul. La mayoría de las enterobacterias utilizan el acetato como única fuente de carbono, excepto Shigella spp., Proteus spp., y Providencia spp. Escherichia coli y Shigella spp., son enterobacterias que presentan gran homología entre sí, y este medio de cultivo es útil para diferenciarlas, especialmente a Escherichia coli,biotipo A-D, inmóvil, anaerogénico, de Shigella spp.
Microorganismos Crecimiento Apariencia
E. coli ATCC 25922 Bueno a excelente Azul
K. pneumoniae ATCC 700603 Bueno a excelente Azul
S. typhimurium ATCC 14028 Bueno a excelente Azul
S. flexneri ATCC 12022 Pobre a bueno Verde
Bacillus subtilis
Gram (+)
Agar Yema de Huevo
o Agar Selectivo B.cereus
Fórmula (en gramos por litro)
Manitol 10.0
Cloruro de sodio 2.0
Sulfato de magnesio 0.1
Fosfato disódico 2.5
Fosfato monopotásico 0.25
Azul de bromotimol 0.12
Piruvato de sodio 10.0
Agar 14.0
En el medio de cultivo, el contenido de peptona es bajo (0.1%), y la adición de piruvato de sodio y emulsión de yema de huevo mejora el aislamiento y esporulación de esta bacteria. Para verificar la utilización del manitol, se usa un indicador de pH, azul de bromotimol. Este medio es selectivo, por el agregado del suplemento para Bacillus cereus (código B03-606-32) con el que se obtiene una concentración final de 100 U de Polimixina B por ml de medio.El diagnóstico primario se basa en la morfología y color de la colonia, en la precipitación de la lecitina hidrolizada y en la falta de utilización del manitol por Bacillus cereus. Las colonias típicas de B. cereus son crenadas, filamentosas de aproximadamente 5 mm de diámetro a las 24 horas de incubación, y tienen un color turquesa (peacock blue) rodeado por un precipitado de hidrólisis de yema de huevo. A las 48 horas de incubación presentan el color con centro grisáceo. Estos hallazgos diferencian B. cereus de B. subtilis y B. licheniformis, pero pueden no diferenciar B. cereus de otras especies de Bacillus, tales como B. thuringiensis, B. anthracis, B. mycoides, y en estos casos, será necesario realizar mas ensayos para su identificación.
Microorganismos Crecimiento
Bacillus cereus ATCC 10876 Bueno
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Bueno
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido
Bacillus subtilis ATCC 6633 Bueno,
Klebsiella
pneumonae
Gram (-)
Agar Verde
Brillante
Fórmula (en gramos por litro)
Pluripeptona 10.0
Extracto de levadura 3.0
Cloruro de sodio 5.0
Lactosa 10.0
Sacarosa 10.0
Rojo fenol 0.08
Medio de enriquecimiento altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella spp., En el medio de cultivo, la pluripeptona y el extracto de levadura, constituyen la fuente de nitrógeno, vitaminas y minerales. La lactosa y la sacarosa son los hidratos de carbono fermentables, el rojo fenol es el indicador de pH, que vira al amarillo cuando hay producción de ácido a partir de la fermentación de azúcares, el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el verde brillante actúa como agente selectivo.}
Microorganismos Características de las colonias
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Rosas, blancas o transparentes sobre fondo rojo
Klebsiella pneumonae ATCC 13883 Colonias mucoides amarillas a verdes.
Shigella flexneri. ATCC 12022 Crecimiento inhibido
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Crecimiento inhibido
Shigella Flexneri
Gram (-)
Agar Mac Conkey
Fórmula (en gramos por litro)
Pluripeptona 5.0
Extracto de carne
5.0
Lactosa 10.0
Mezcla de sales biliares
8.5
Citrato de sodio 8.5
Tiosulfato de sodio
8.5
Citrato férrico 1.0
Agar 13.5
Verde brillante 0.00033
Rojo neutro 0.025
Es un medio de cultivo selectivo y diferencial. La selectividad, esta dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayoría de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp. Es diferencial debido a la fermentación de la lactosa, y a la formación de ácido sulfhídrico a partir del tiosulfato de sodio. Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obteniéndose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo. Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes.. La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formación de sulfuro de hierro. Para aumentar la selectividad, se recomienda incubar previamente la muestra en Selenito caldo (B02-120-05).
Microorganismos Colonias
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Transparentes, centro negro
Shigella flexneri Incoloras
Shigella sonnei Incoloras
Proteus mirabilis ATCC 43071 Transparentes, centro negro
Escherichia coli ATCC 25922 Rosadas a rojas con halo turbio
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas cremosas y mucosas
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Incoloras, de muy escaso crecimiento
Enterobacter
cloacae
Gram (-)
Agar
Eosina Azul de Metileno
Fórmula (en gramos por litro)
Agar 13.5 g
Azul de metileno
0.065 g
Eosina Y 0.4 g
Fosfato dipotásico
2.0 g
Lactosa 5.0 g
Peptonas 10.0 g
Sacarosa 5.0 g
El medio de cultivo eosina y azul de metileno agar es selectivo y diferencial para el aislamiento de bacilos entéricos que permite una diferenciación entre las colonias de organismos fermentadores de lactosa y aquellos que no la fermentan. La presencia de sacarosa permite para ciertos miembros del grupo coliforme, fermentarla con más facilidad que la lactosa. Las colonias lactosa positivas son verdes con brillo metálico o poseen centros oscuros con periferias transparentes incoloras , mientras que aquellas que son negativas en lactosa o sacarosa son rosa pálido translucidas.
Microorganismos Crecimiento
Escherichia coli ATCC 25922 Colonias medianas azul a morado con brillo metálico verdoso.
Enterobacter aerogenes ATCC 13048 o Enterobacter cloacae ATCC 13047
Colonias grandes con centro oscuro y bordes rosados, generalmente sin brillo metálico
Salmonella typhimurium ATCC 14028 o Shigella flexneri ATCC 12022 ó 9199
Colonias medianas transparentes , incoloras a rosa
Proteus mirabilis ATCC 43071 Transparentes o rosadas
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Colonias mucosas rosadas- purpuras
Staphylococcus aureus ATCC 25923 o Enterococcus faecalis ATCC 29212
Inhibición total o colonias puntiformes
Leuconostoc
Gram (+)
Agar Sangre
Fórmula (en gramos por litro)
Infusión de músculo de corazón
375.0
Peptona 10.0
Cloruro de sodio 5.0
Agar 15.0
Leuconostoc se desarrolla bien en placas de agar sangre, es de forma esférica o lenticular y mide de 0,5 a 0,7 µ de ancho por 0,7 a 1 µ de longitud. La temperatura óptima para su desarrollo es entre 20 y 30º C, con un pH entre 4,4 y 5. En la superficie del agar son a-hemolíticas o no hemolítica, por lo que puede confundirse con otros Streptococcus grupo viridans -razón por la que el laboratorio evaluó resistencia a vancomicina por difusión-, Enterococcus o Lactococcus sp. El 30% de estas bacterias pueden reaccionar con antisueros contra grupo D
2,8.
Proteus mirabilis
Gram (-)
Agar
Sulfito de Bismuto
Fórmula (en gramos por litro)
Agar 20.0 g
Dextrosa 5.0 g
Extracto de carne
5.0 g
Fosfato de sodio
4.0 g
Peptonas 10.0 g
Sulfato ferroso 0.3 g
Sulfito de bismuto (indicador)
8.0 g
La presencia de sulfito de bismuto y de verde brillante inhiben el crecimiento de bacterias Gram positivas y de la mayoría de las bacterias Gram negativas. La producción de sulfuro de hidrógeno se manifiesta en el centro de la colonia por un precipitado negro y un halo negro grisáceo con brillo metálico por la reacción de los iones bismuto con el sulfuro de hidrógeno.
Microorganismos Crecimiento
Salmonella typhi ATCC 19430 Colonias con centro negro y bordes claros, a las 48 h con halo negro grisáceo y brillo metálico.
Salmonella enteritidis ATCC 13076 Colonias negras a verdes
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Colonias negras a verdes.
Proteus mirabilis ATCC 12453 Colonias pequeñas sin Swarming (crecimiento en olas) verde pálido a veces mucoides
Escherichia coli ATCC 25922 Crecimiento inhibido o colonias verdes
Yersinia
enterocolitica
Gram (-)
Agar CNI Fórmula (en gramos por litro)
Peptona de caseina 10.0
Peptona de carne 10.0
Extracto de levadura 2.0
Manitol 20.0
Cloruro de sodio 1.0
Sulfato de magnesio 0.01
Piruvato de sodio 2-0
Agar 12.5
Mezcla de sales biliares 1
Rojo Neutro 0.03
Cristal violeta 0.001
Varios antibióticos (Suplemento selectivo para Yersinia (CIN) así como el Violeta cristal y el desoxicolato inhiben ampliamente la flora acompañante perturbante. Por otra parte, una base nutritiva de alto valor favorece, conjuntamente con el piruvato, el crecimiento de las Yersinias. Éstas degradan el manitol existente formando ácido, de tal forma, que sus colonias toman un color rojo debido al viraje del indicador Rojo neutro. Las Yersinias crecen como colonias con un centro rojo oscuro y un halo transparente. El tamaño de las colonias, la anchura del borde de las mismas y la estructura superficial, pueden variar dependiendo del serotipo. Ciertos gérmenes acompañantes (por ejemplo algunas Enterobacteriáceas y Pseudomonas) también pueden aparecer en el medio pero con un crecimiento escaso.
Microorganismos Crecimiento Centro rojo en las colonias
Yersinia enterocolitica ATCC 9610 Yersinia enterocolitica ATCC 35669
Bueno/muy bueno Positivo
Escherichia coli ATCC 25922 Nulo
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Nulo
Enterobacter cloacae ATCC 13047 Nulo/ligero
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Nulo
Diferenciación Salmonella y
Shiguella
Agar
Salmonella Shiguella
Fórmula (en gramos por litro)
Pluripeptona 10.0
Extracto de carne 5.0
Lactosa 10.0
Mezcla de sales biliares
8.5
Citrato de sodio 8.5
Tiosulfato de sodio 8.5
Citrato férrico 1.0
Agar 13.5
Verde brillante 0.00033
Rojo neutro 0.025
Es un medio de cultivo selectivo y diferencial. La selectividad, esta dada por las sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Grampositivas, de la mayoría de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteusspp. Es diferencial debido a la fermentación de la lactosa, y a la formación de ácido sulfhídrico a
partir del tiosulfato de sodio
NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Enfriar a 45-50C y distribuir unos 20 ml por placa. Secar la superficie del medio unos minutos en la estufa.
Microorganismos Características de las colonias
Escherichia coli ATCC 25922 Cremiento de colonias rosadas o rojas
Klebsiella Pneumonae ATCC 700603 Colonias rosadas cremosas y mucosas
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Colonias Transparentes, centro negro
Shigella flexneri. ATCC 12022 Colonias Transparentes
Proteus mirabilis Colonias Transparentes, centro negro
Diferenciación de Enterobacterias
Agar TSI (Triple Sugar -
Iron)
Fórmula (en gramos por litro)
Agar 20.0 g
Dextrosa 5.0 g
Extracto de carne
5.0 g
Fosfato de sodio
4.0 g
Peptonas 10.0 g
Sulfato ferroso 0.3 g
Sulfito de bismuto (indicador)
8.0 g
El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe
+3 los cuales se combinan con el ácido
sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador
rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido.
El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal
de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.
Bibliografia Consultada
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/sangreagarbase.htm
http://www.articlearchives.com/manufacturing/food-mfg-dairy-product-cheese/1294421-1.html
http://www.biol.unlp.edu.ar/microbiologiagral/problemas01-08.doc
http://tegra.lasalle.edu.co/dspace/bitstream/10185/1222/1/13961076.pdf
http://80.37.246.49/ScharlabDades/Productos/descargarpdf.php?pag=38&pm=803
http://www.alimentariaonline.com/apadmin/img/upload/MLC006_quesoprobioWSF.pdf
http://www.farmacopea.org.mx/consulta/dispmed/DMD016.pdf
http://www.farmacopea.org.mx/consulta/dispmed/DMD016.pdf
Tubo Microorganismo
Tubo 1 Sin inoculo
Tubo 2 Escherichia coli
Tubo 3 Enterobacter cloacae
Tubo 4 Klebsiella pneumonae
Tubo 5 Pseudomona aeruginosa
Tubo 6 Shalmonella Thyphi
Tubo 7 Shiguella sonnei
Hecho por:
Guillermo Mercado Torres
Orlando Fabrizio Delgado Mota
Antonio Dominguez Garza