- unt tesis para optar el grado de maestra en ciencias

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

ESCUELA DE POSGRADO

UNIDAD DE POSGRADO EN CIENCIAS MÉDICAS

Efecto de la anestesia general balanceada y anestesia intravenosa total sobre la

actividad antioxidante de la catalasa en colecistectomía laparoscópica

TESIS PARA OPTAR EL GRADO DE

MAESTRA EN CIENCIAS

MENCIÓN EN

FISIOLOGÍA Y BIOFÍSICA

AUTORA: Br. Chunga Flores, Betsabe Marianella

ASESOR: Msc. Larios Canto, Angel Alfredo

TRUJILLO-PERÚ

2020

N° De Registro:_______

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

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JURADO DICTAMINADOR

Dr. Jorge Luis Campos Reyna

Presidente

Dra. Luz Marina Guerrero Espino

Secretaria

Ms. Ángel Alfredo Larios Canto

Asesor



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PRESENTACIÓN

Señores miembros del jurado dictaminador:

De conformidad con las Disposiciones Legales y Vigentes del Reglamento de Grados

y Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, presento a vuestra consideración y claro

discernimiento la tesis intitulado:

EFECTO DE LA ANESTESIA GENERAL BALANCEADA Y ANESTESIA

INTRAVENOSA TOTAL SOBRE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DE LA

CATALASA EN COLECISTECTOMÍA LAPAROSCÓPICA

Con el propósito de obtener el grado académico de Maestro

Trujillo, Febrero del 2020

Br. Betsabe Marianella Chunga Flores



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DEDICATORIA

Le agradezco a Dios por haberme acompañado y guiado a lo largo de mi formación

académica, por ser mi fortaleza en los momentos de debilidad y por brindar una vida llena de

aprendizaje, experiencias y sobre todo felicidad.

A mis padres José Alejandro Chunga Incio y Naldy Soledad Flores Gálvez, gracias por su

apoyo, por la orientación que me han dado, por los valores que me han inculcado y por

haberme dado la oportunidad de tener una excelente educación en el transcurso de mi vida.

Agradezco a Lizbeth Alejandra Chunga Flores, mi hermana, por siempre brindarme su

apoyo en todo momento. Gracias por tu cariño, tiempo y tu apoyo incondicional

A Alejandrina Gálvez Rivas, mi abuelita por ser una valiosa orientación y brindarme las

enseñanzas adecuadas para el transcurso de mi vida.

A mi esposo, Alejandro Siccha López, que nunca titubeaste para ayudarme, gracias por tu

tiempo, por tu amor y por estar siempre conmigo a pesar de las adversidades.

A mi hijos Rodrigo Siccha Chunga e Ivan Siccha Chunga, que siempre son mi motivo para

luchar por las metas que me he propuesto.



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AGRADECIMIENTOS

Agradezco a mi asesor Ms. Ángel Alfredo Larios Canto, por su apoyo constante

y desinteresado durante la ejecución y culminación del presente trabajo. Gracias por darme

la oportunidad de crecer profesionalmente y aprender cosas nuevas, por los conocimientos

brindados y sobre todo por su amistad.

Al Dr. Julio Campos Florián docente del Departamento Académico de Farmacia

y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, a quien expresamos nuestra gratitud

por sus acertadas y oportunas sugerencias en la ejecución y culminación del presente trabajo

de investigación.



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vi

INDICE

RESUMEN .......................................................................................................................... vii

ABSTRACT ....................................................................................................................... viii

I. INTRODUCCIÓN: ..................................................................................................... 1

II. MATERIAL Y METODO.......................................................................................... 7

III. RESULTADOS: ....................................................................................................... 14

IV. DISCUSIÓN: ............................................................................................................ 21

V. CONCLUSIONES .................................................................................................... 24

VI. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA .......................................................................... 25



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RESUMEN

El presente estudio compara dos tipos de técnicas de anestesia; Anestesia General

Balanceada (AGB) y la Anestesia General Intravenosa Total (TIVA) sobre la actividad

específica de la catalasa en tres momentos(M); M1: al instalarse la vía (8:30 am – 9.30 am),

M2: 5 minutos antes del neumoperitoneo y M3: 5 minutos después del neumoperitoneo. Se

usó el Método de AEBI para medir la actividad específica de la catalasa. Ambas técnicas

demostraron que tiene efecto antioxidante, sin embargo postulamos que el TIVA tiene un

mejor efecto debido a que la estructura química del propofol es similar al de la vitamina E,

que es antioxidante y actuando en sinergia con la actividad de la catalasa.

Palabras claves: Anestesia general balanceada, Anestesia General Intravenosa Total,

catalasa, antioxidante.



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viii

ABSTRACT

The present study compares two types of anesthesia techniques; Balanced General

Anesthesia (AGB) and Total Intravenous General Anesthesia (TIVA) on the specific activity

of catalase in three moments (M); M1: when the track is installed (8:30 am - 9.30 am), M2:

5 minutes before the pneumoperitoneum and M3: 5 minutes after the pneumoperitoneum.

The AEBI Method was used to measure the specific activity of catalase. Both techniques

showed that it has an antioxidant effect, however we postulate that TIVA has a better effect

because the chemical structure of propofol is similar to that of vitamin E, which is

antioxidant and acting in synergy with the activity of catalase.

Keywords: Balanced general anesthesia, Total Intravenous General Anesthesia, catalase,

antioxidant.



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1

I. INTRODUCCIÓN:

El objetivo de las prácticas de anestesia general es disminuir las condiciones potencialmente

perjudiciales para el organismo al nivel celular y conducir la anestesia de modo eficaz. La

anestesia y la cirugía causan estrés, siendo los mecanismos de defensa inmunológicos

interrumpidos en donde los macrófagos causan la liberación de oxígeno libre hacia el medio

ambiente al inducir una reacción inflamatoria. Esos radicales conducen a la formación de

metabolitos tóxicos, al causar daños celulares con la pre oxidación de lípidos y proteínas. (1)

La Anestesia General Balanceada fue introducido por Lundy en 1926, es una técnica que

combina agentes intravenosos e inhalatorios en la inducción y mantenimiento de los

diferentes componentes de la anestesia general. El problema con el concepto clásico de

anestesia general se hizo obvio cuando los bloqueadores neuromusculares, los opioides y

barbitúricos comenzaron a ser usados ampliamente en combinación con anestésicos

inhalados. (2)(3)

El sevoflurano es un anestésico inhalatorio halogenado; sintetizado a finales de la década de

los sesenta por Tallin et al. en los Laboratorios Travenol, que pertenece a la familia de los

éteres halogenados. La inducción es suave y rápida, eliminando la necesidad de punciones

con agujas, sobre todo en pacientes pediátricos o adultos con dificultad para acceder una vía

venosa periférica de inicio, tiene poco olor, no es irritante para las vías aéreas; tiene un

coeficiente de solubilidad sangre/gas bajo (0.66) y facilidad de ajuste de dosis. Estas

propiedades sugieren que puede ser específico para una inducción y emersión rápida. Su

control de la respuesta hemodinámica al estrés puede ser consecuencia a sus efectos en la

médula espinal sobre la inmovilidad y el amortiguamiento de la transmisión nociceptiva.

Debido a las características señaladas se considera un anestésico eficaz para su empleo en

cirugías ambulatorias. Se han realizado estudios en preparaciones de médula espinal in vitro

que han mostrado que los éteres halogenados pueden deprimir componentes específicos de

los reflejos de la raíz ventral provocados por estimulación de la raíz dorsal. Se ha demostrado

que el sevoflurano deprime el reflejo monosináptico.(4)(5)

Con relación a la acción oxidante del sevoflurano, algunos autores han sugerido que el

sevoflurano es capaz de producir especie reactiva de oxígeno (ERO) como el radical

hidroxilo (OH˙ ), el radical anión superóxido (O2¯) y el peróxido de hidrógeno (H2O2)

, además de promover la lipoperoxidación , debilitando el sistema de enzimas antioxidantes



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en diversos tejidos. Se reporta que el sevoflurano pueda ser capaz de alterar el flujo de los

electrones a lo largo de la cadena respiratoria a nivel mitocondrial, generando la formación

de ERO. (6)(7)

La Anestesia General Intravenosa Total (TIVA) se obtiene por la administración simultánea

de diferentes fármacos parenterales que poseen una acción principal, de máxima

especificidad, cuya finalidad primaria es la de proporcionar a los pacientes quirúrgicos

analgesia y protección neurovegetativa, además de relajación muscular e hipnosis. Cada uno

de estos elementos define la anestesia general que proporciona excelentes condiciones de

operabilidad con intoxicaciones mínimas y recuperaciones muy rápidas; así, las

interacciones entre los fármacos disminuyen su dosificación en forma importante. Con la

aparición o síntesis de nuevos anestésicos endovenosos más nobles y con el desarrollo de

técnicas endovenosas en infusión en la forma más simple o compleja mediante bombas de

infusión, con el apoyo de la farmacocinética y farmacodinamia, surge en la actualidad el

concepto de la anestesia total intravenosa. El prototipo del anestésico representativo para

estas técnicas es el propofol, derivado de los eugenoles. (3)

El propofol (2,6 - diisopropilfenol) está constituido por un anillo fenólico con dos grupos

isopropilo fijos . La alteración de la longitud de la cadena lateral de este alquilfenol influye

sobre las características de la potencia, la inducción y la recuperación. Es insoluble en agua

ya que se presenta como una emulsión lipídica que contiene aceite de soja, fosfátido de huevo

purificado, glicerol, hidróxido de sodio y agua. La solución es estable a temperatura

ambiente, aunque se debe evitar su manipulación ya que el solvente graso favorece su

contaminación. (5)

Posee una alta afinidad por las proteínas (97%). Si bien su mecanismo de acción no es del

todo conocido, parece que potencia la inhibición sináptica mediada por el GABA (ácido

gamma amino butírico), al igual que otros anestésicos generales. Se ha descrito además un

efecto inespecífico sobre los canales de sodio, sin conocer el papel exacto que juega en su

mecanismo de acción. (5)

La estructura química del propofol es similar a la de algunos consumidores de radicales

libres, como la vitamina E endógena y el hidroxitolueno butilado; Descubrimos que el

propofol aumenta la fluidez de la membrana del eritrocito y previene la hemólisis (parecido

con la vitamina E), además de presentar una actividad antioxidante. El propofol protege los

eritrocitos del estrés oxidativo y del estrés físico. (8)



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3

El remifentanilo es el último opiáceo agonista de los receptores μ. Se describió por primera

vez en 1991 . Se desarrolló para cubrir la necesidad de un opioide de acción ultracorta, con

un comienzo de acción breve y una recuperación rápida, con escasos efectos adversos. Posee

un efecto analgésico potente, similar al fentanilo y es dosis-dependiente. La máxima acción

de un bolo de 1 μg Kg-1 se alcanza en 1-2 minutos y el efecto dura de 10 a 15 minutos. (9)

Los mecanismos de defensa del cuerpo jugarían un papel importante en la formación de

antioxidantes al tratar de minimizar el daño. El cuerpo humano tiene un sistema de defensa

antioxidante complejo que incluye las enzimas superóxido dismutasa (SOD), glutatión

peroxidasa (GPx) y catalasa. Estos bloquean la iniciación de reacciones en cadena de

radicales libres. Los componentes antioxidantes no enzimáticos consisten en moléculas tales

como glutatión (GSH), vitamina E, ácido ascórbico y beta-caroteno, el ácido úrico que

reaccionan con especies de oxígeno activadas y, de ese modo, evitan la propagación de las

reacciones en cadena de radicales libres. (10)(11)

Las enzimas antioxidantes, tales como la glutatión peroxidasa (GPx), la superóxido

dismutasa (SOD) y la catalasa, tienen un rol de mecanismo de defensa del cuerpo contrala

lesión tisular causada por los (ERO). La actividad de esas enzimas depende de las tasas de

síntesis y degradación de los radicales libres, de la nutrición y de la condición de los

oligoelementos. (1)

Las reacciones catalizadas por la catalasa son uno de los más potentes mecanismos de

degradación que se fundamentan en la oxido-reducción, no permiten el almacenamiento de

compuestos tóxicos para las células. Esta enzima utiliza dos moléculas de peróxido de

hidrógeno como substrato, que se considera un agente oxidante y lo degrada en agua y

oxígeno molecular. El oxígeno molecular se utiliza en la oxidación de toxinas, incluyendo

fenoles, ácido fórmico, formaldehídos y alcoholes. Estas contienen grupos hem con un

centro de hierro (Fe) como sitio activo y actúan por un proceso de óxido-reducción (redox),

esta enzima se encuentra en altas concentraciones en compartimentos celulares llamados

peroxisomas. En algunos organismos puede encontrarse en forma bifuncional, ya que

además puede actuar con actividad de peroxidasa, esta última función evita el

acumulamiento de compuestos tóxicos RH2 (Radical-Fk), derivados de las vías metabólicas

de la célula. (10)(11)

La familia de las catalasas más distribuidas son monofuncionales, exhiben la actividad más

elevada, aunque también pueden tener actividad moderada de peroxidasa, pero solo en



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presencia de moléculas pequeñas como agentes reductores, como el etanol y metanol. Otro

tipo de familia es la catalasa-peroxidasas que se encuentran mayormente distribuidas en las

bacterias, pero solo se han descritos en cuatro géneros de arqueobacterias y en los

microorganismo eucariotas solo se han encontrado en los hongos. Manganeso catalasa se

encuentran en muchos microorganismos que carecen de hemoproteinas, pues son incapaces

de sintetizar el grupo hemo. (12)

La catalasa en los hematíes pueden llegar a inhibir la apoptosis; se ha demostrado que la

CAT (catalasa) y SOD ( superoxido dismutasa) reaccionan de forma sinérgica para

protegerse unos a otros , igualmente también son activas para la desintoxicación de H2O2 en

eritrocitos. La CAT juega un papel importante cuando el eritrocito está expuesto a un

aumento del flujo de H2O2. (13)

Desde que en 1985 en Alemania y en 1987 en Francia se describieron las primeras

colecistectomías por vía laparoscópica, se han desarrollado distintas modificaciones a las

estandarizadas técnicas americana y francesa. También se han descrito varios efectos

conocidos del neumoperitoneo; El neumoperitoneo se genera insuflando gas intrabdominal,

habitualmente CO2. El aumento de presión intrabdominal durante la cirugía laparoscópica,

implica cambios desde el punto de vista cardiovascular, pulmonar, metabólico y renal.

Produce un cierto grado de isquemia de los órganos esplácnicos por disminución del flujo

vascular, hecho que se traduce en alteraciones funcionales y estructurales. Tras un periodo

de tiempo sometido a un aumento de presión, al desinsuflar el abdomen se produce una

secuencia de isquemia reperfusión, que puede conllevar unos potenciales daños relacionados

con la hipoxia celular.(14)(15)

Varios estudios han demostrado que los efectos de los agentes anestésicos sobre el estrés

oxidativo y la capacidad antioxidante varían. Los anestésicos volátiles mostraron inducir un

estrés oxidativo y una respuesta inflamatoria al causar la liberación de radicales libres, tales

como mediadores inflamatorios y aniones su peróxidos, disminuir los mecanismos de

defensa antioxidantes e inducirla expresión génica de las citocinas proinflamatorias, pero

algunos anestésicos también demostraron que pueden tener efectos antioxidantes. Además

de eso, existe informe de que los agentes anestésicos pueden desencadenar el estrés oxidativo

y reducir la concentración sérica de oligoelementos. (1)

Erbas,M; en su estudio reporta la comparación de los efectos de estos anestésicos sobre el

sistema oxidante/antioxidante en diversas enzimas; una de ellas es la catalasa debido a la



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gran importancia en el sistema antioxidante. Los resultados que obtuvieron fueron que en el

grupo del sevoflurano ; el estrés oxidativo aumento; así también el efecto antioxidante

también aumento de manera significativa; mientras que en el propofol el sistema

antioxidante también aumento de manera significativa debido al parecido químico de la

vitamina E. (8)

Otro estudio realizado por Akin,M llegaron a las conclusiones que el sevoflurano y el

propofol activaron el sistema antioxidante contra el estrés oxidativo ; observándose un

diferencia estadística significativa en la catalasa.(10)

El presente estudio compara entre estos dos tipos de técnicas de anestesia; anestesia general

balanceada y la anestesia intravenosa total sobre la actividad de la catalasa; planteándonos

el siguiente problema:

● ¿Cuál es el efecto comparativo entre la anestesia general balanceada y la

anestesia intravenosa total sobre actividad antioxidante de la catalasa?

Ante la cual postulamos la siguiente hipótesis:

● La anestesia general balanceada tiene un mayor efecto antioxidante que la

anestesia intravenosa total sobre la catalasa en colecistectomía laparoscópica.

1. OBJETIVOS

1.1. Objetivos generales:

Comparar el efecto entre la anestesia general balanceada y la anestesia

intravenosa total sobre la actividad antioxidante de la catalasa en

colecistectomía laparoscópica

1.2. Objetivos específicos:

1. Determinar el efecto de la anestesia general balanceada en la

actividad antioxidante de la catalasa en colecistectomía

laparoscópica



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2. Determinar el efecto de la anestesia intravenosa total sobre la

actividad antioxidante de la catalasa en colecistectomía

laparoscópica

3. Comparar las variaciones de la actividad de la catalasa con

Anestesia General Balanceada y la Anestesia General Total

Intravenosa en Colecistectomía Laparoscópica.



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II. MATERIAL Y METODO

1. DEFINICION DE LA POBLACION OBJETIVO:

El presente trabajo se realizó en pacientes ASA I sometidas a Colecistectomía

Laparoscópica, bajo Anestesia General Inhalatoria Balanceada ó Anestesia

General Total Intravenosa en la sala de operaciones del Hospital Belén de

Trujillo que cumplieron los siguientes criterios:

De Inclusión

▪ Edad comprendido entre los 30 y 45 años

▪ Pacientes que ingresen a la sala de operaciones entre 8.30 am y 9.30 am

▪ Haber aceptado participar en el estudio

De Exclusión:

● Pacientes con disfunción endocrina

● Transfusión de sangre en las últimas 2 semanas.

● Signos de infección o inflamación

● Historial de uso de medicación en el preoperatorio

● Anemia y hemorragia que necesite transfusión durante la cirugía serán

excluidos del estudio.

● Historial de tratamiento con inmunosupresores

2. MÉTODOS DE SELECCIÓN Y ESTANDARIZACIÓN DE LA

TÉCNICA ANESTÉSICA:

Se seleccionó al azar 18 pacientes por cada grupo (I y II) a simple ciego

sometidos a Colecistectomía Laparoscópica y divididos en dos grupos: Grupo

I: Anestesia General Inhalatoria Balanceada y Grupo II Anestesia General

Total Intravenosa

En sala de operaciones todos los pacientes seleccionados se les instaló una vía

periférica con solución de Cloruro de Sodio 0.9 %, registrándose al inicio y



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transoperatorio los controles de las funciones vitales: presión arterial,

frecuencia cardiaca, frecuencia respiratoria y saturación de oxígeno (SpO2)

El estado anestésico se mantendrá de acuerdo a requerimiento: con O2 a 8

ml/Kg de volumen tidal hasta conseguir un plano anestésico quirúrgico,

durante toda la cirugía, Para la aplicación de la anestesia fueron distribuidos

equitativa y aleatoriamente en 2 grupos, por sorteo

● GRUPO I:

o INDUCCIÓN: Sevorane 5-6 vol % y Remifentanilo infusión de

0.5-1.0 µg/Kg/minuto.

o MANTENIMIENTO: Sevorane 1 – 1.5 vol % y Remifentanilo

infusión de 0.10 – 0.35 % µg/Kg/minuto.

● GRUPO II:

o Propofol: 1 – 2 mg/Kg y Remifentanilo infusión de 0.5-1.0

µg/Kg/minuto.

o MANTENIMIENTO: Propofol: 50 – 150 µg/Kg/minuto y

Remifentanilo infusión de 0.10 – 0.35 % µg/Kg/minuto.

Se tomó muestras de sangre a cada paciente en los siguientes momentos:

Momento 1: al instalarse la vía (8:30 am – 9.30 am)

Momento 2: 5 minutos antes del neumoperitoneo

Momento 3: 5 minutos después del neumoperitoneo



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Diseño Estadístico de la Muestra

COMPARACIÓN DE DOS MEDIAS

(Se pretende comparar si las medias son diferentes)

Tipo de test (unilateral o bilateral) BILATERAL

Nivel de confianza o seguridad (1-α) 95%

Poder estadístico 90%

Precisión (d) 0.50

Varianza (S2) 0.15

TAMAÑO MUESTRAL (n) 13

EL TAMAÑO MUESTRAL AJUSTADO A PÉRDIDAS

Proporción esperada de pérdidas ( R ) 15%

MUESTRA AJUSTADA A LAS PÉRDIDAS 18

Diseño de Contrastación

Se usó el Método de 2 casillas

Anestesia

General

Balancea

da

G1 M1

M3

M2 M3

Anestesia General

Total Intravenosa

G2 M2 M1



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EVALUACION DE LA ACTIVIDAD DE CATALASA

FUNDAMENTO

La actividad de catalasa (CAT) fue determinada por el método descrito por Aebi y cols ,

basada en la cinética de descomposición del peróxido de hidrógeno a 240 nm, y expresada

en base a la constante de primer orden (k)/mg proteína o g hemoglobina,

respectivamente.(11)(16)

A) PREPARACION DEL HEMOLIZADO:

La sangre recolectada en 03 momentos (M1, M2, M3) en tubos de ensayo

heparinizados, se centrifugó a 2000 rpm por un espacio de 15 minutos, luego se

separó el sedimento de eritrocitos y se lavaron 3 veces con una solución buffer de pH

7.4. para lo cual se diluyó la tercera parte del volumen de eritrocitos con agua

destilada de manera que se obtuvo una concentración ~ 5g Hb/100Ml. Seguidamente

se preparó una dilución de 1/500 mL de este hemolizado concentrado con buffer

sodio-fosfato Ph 7.0 Previamente al ensayo se determinó el contenido de Hb por

duplicado.

B) DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE CATALASA:

B.1) Procedimiento: Blanco: 1 mL de buffer fosfato Ph 7.0 + 2 Ml de la dilución

del hemolizado. Desconocido: 2 ml de dilución del hemolizado + 1 mL de H2O2 al

30 m M. Inmediatamente se DETERMINA LA ABSORBANCIA a una longitud de

onda de 240 nm, cada 10 segundos hasta completar 1 minuto.

La actividad de la catalasa (U/mL) se obtuvo multiplicando la variación de

absorbancia/min por el factor 41,550.

B.2) Obtención del factor

La actividad enzimática se expresa en unidades internacionales(U) definiéndose una

Unidad como la transformación de 1 µ mol de producto por minuto durante la

reacción enzimática. Matemáticamente se expresa con la siguiente ecuación:



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11

Bioquímicamente la actividad enzimática se expresa por unidad de volumen esto es, en U/

m L. Si despejamos ΔC, obtenemos:

La Ley de Lambert-Beer es fundamental en todas las determinaciones espectrofotométricas.

Esta ley establece que el cambio de absorbancia es directamente proporcional tanto

a la absortividad molar, así como el cambio de concentración del compuesto en

análisis, como el trayecto óptico de haz.

Matemáticamente se expresa con la siguiente ecuación:

La substitución de ecuación (1) en la ecuación (2) resulta en :

Por lo cual para obtener U/m L, la ecuación resultante es:

De donde:

U = Unidades de actividad (µ mol/min)

ΔA= Variación de absorbancia del compuesto

ԑ = Absortividad molar de H2O2 (0.036 cm 2/µ mol)

b =Espesor de la cubeta(cm)

t= Tiempo en minutos



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12

ΔC= Variación de concentración del compuesto(µmol)

Por lo anterior:

B.3) Factor ajustado:

Para determinar el cálculo de la actividad de catalasa (U/m L) se tomó en

cuenta otros parámetros de análisis: el volumen total del ensayo en la cubeta

y la dilución final de la muestra. En este trabajo se agregó 10µL de la muestra

en 5 mL de reacción final, por lo tanto, la dilución final de ensayo fue 1:500.

Integrando estos parámetros a la ecuación (3.b) resulta lo siguiente:

U/m L=(ΔA) (27.7 U/m L) (Vol. De la cubeta) (dilución fina)

U/m L= (ΔA) (27.7 U/m L) (3) (500)

Actividad Enzimática = (ΔA) (41,550 U/m L)

c) Determinación de Actividad Específica:

Para determinar la proporción de una enzima con respecto a la concentración de proteínas

de la muestra se determina la actividad específica de la enzima en U/g Hb. En el trabajo

realizado la actividad específica se calculó dividiendo la actividad enzimática de catalasa

(CAT) (U/m L) entre la concentración de hemoglobina (g/L)

Actividad Específica = Actividad enzimática de CAT/Concentración de hemoglobina

Actividad Específica = (U/m L) (g/m L)

Actividad Específica= U/g Hb



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3. EVALUACIÓN ESTADÍSTICA

Se usó el paquete estadístico SPSS v.20.0 para procesar los datos; se reportan en

tabla resumen incluyendo medias y desviación estándar; con un nivel de

significancia del 95% (p<0.05).



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III. RESULTADOS:

En la presente investigación se evaluaron a 18 personas para cada grupo; tomando muestras

en 3 tiempos como se describió más específicamente en metodología.

Tabla N°1: Actividad Antioxidante De La Catalasa (U/Mg) En El Proceso De La

Colecistectomía Laparoscópica

A) Anestesia General Balanceada

MOMENTOS EFECTO

PARAMETRO M1 M2 M3 M2-M1 M3-M1

MUESTRA 18 18 18 18 18

MEDIA 0.17443 0.16798 0.19601 -0.00645 0.02158

DES.

ESTANDAR

0.0913 0.088 0.14095 0.12155 0.16659

B) Anestesia Intravenosa Total

MOMENTOS EFECTO

PARAMETRO M1 M2 M3 M2-M1 M3-M1

MUESTRA 18 18 18 18 18

MEDIA 0.12787 0.1756 0.13334 0.04773 0.00547

DES.

ESTANDAR

0.4967 0.1184 0.04052 0.10769 0.0484



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15

0.17443 0.16798 0.19601

0.127870.1756 0.13334

0

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

M1 M2 M3

Actividad Antioxidante De La Catalasa (U/Mg) En El

Proceso De La Colecistectomía Laparoscópica

ANESTESIA GENERAL BALANCEADA

ANESTESIA INSTRAVENOSA TOTAL

Med

ia d

e la

Act

ivid

ad

An

tioxid

an

te d

e la

Ca

tala

sa(U

/mg

)

En la tabla 1, es un resumen de las medias del comportamiento de la actividad de la

catalasa en los tres momentos y la comparación entre ambas técnicas.



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TABLA N°2:

Comparación de la actividad antioxidante de la Catalasa (U/mg) en el Momento 1

Parámetros

Anestesia General

Balanceada

Anestesia Intravenosa

Total

Muestra 18 18

Media 0.17443 0.12787

Desv. Estándar 0.09130 0.04967

t 1.9005

p 0.0659

0.17443

0.12787

0

0.02

0.04

0.06

0.08

0.1

0.12

0.14

0.16

0.18

0.2

Anestesia General Balanceada Anestesia Intravenosa Total

Med

ia d

e la

Act

ivid

ad a

nti

ox

ida

nte

de

la

Cata

lasa

(U

/mg)

Comparación de la actividad antioxidante de la Catalasa (U/mg)en el

momento 1 .

En la tabla 2, es la comparación de la media de la actividad antioxidante de la catalasa en el

momento 1(al instalarse la vía)



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TABLA N°3: Comparación de la actividad antioxidante de la Catalasa (U/mg) en el

Momento 2

Parámetros

Anestesia General

Balanceada


Total

Muestra 18 18

Media 0.16798 0.17560


t 0.1974

p 0.8458

En la tabla 3, es la comparación de la media de la actividad antioxidante de la catalasa en

el momento 2(5 minutos antes del neumoperitoneo)



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TABLA N°4:

Comparación de la actividad antioxidante de la Catalasa (U/mg) en el Momento 3.

Parámetros Anestesia General

Balanceada


Total

Muestra 18 18

Media 0.19601 0.13334


t 1.8131

p 0.0787

0.19601

0.13334

0

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

Anestesia General Balanceada Anestesia Intravenosa Total

Med

ia d

e la

Act

ivid

ad a

nti

oxid

an

te d

e la

Cata

lasa

(U

/mg)

Comparación de la actividad antioxidante de la Catalasa (U/mg) en el

momento 3.

En la tabla 4, es la comparación de la media de la actividad antioxidante

de la catalasa en el momento 3 (5 minutos después del neumoperitoneo)

)



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TABLA N°5:

Comparación del Efecto de la Anestesia General Balanceada y Anestesia Intravenosa

Total de la activdad antioxidante de la Catalasa( U/mg) entre el Momento 2 y el Momento

1


Balanceada


Total

Muestra 18 18

Media -0.00645 0.04773


t 1.3709

p 0.1882

TABLA N°6:


momento 2 y el momento 1; el comportamiento que tuvo la catalasa en esos dos momentos.



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TABLA N°6:

Comparación del Efecto de la Anestesia General Balanceada y Anestesia Intravenosa

Total de la activdad antioxidante de la Catalasa( U/mg) entre el Momento 3 y el Momento

1


Balanceada


Total

Muestra 18 18

Media 0.02158 0.00547


t 0.3941

p 0.6960


momento 3 y el momento 1; el comportamiento que tuvo la catalasa en esos dos momentos.



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IV. DISCUSIÓN:

Los resultados obtenidos en este estudio indican que el estrés oxidativo durante la

colecistectomía laparoscópica varía en función de la técnica anestésica utilizado.

En la tabla 1, se puede observar el efecto y las variaciones de la catalasa en los tres

momentos. En la tabla 2, se observa que la actividad antioxidante de la catalasa esta

aumentada en el grupo de la anestesia general balanceada antes de instalarse la vía en

comparación con el grupo del TIVA; no siendo estadísticamente significativo. En la tabla 3,

se observa el comportamiento que tiene la enzima frente a la anestesia general balanceada,

el cual disminuye después del procedimiento quirúrgico; eso también se verifica en la tabla

5 donde se compara el momento 2 con el momento 1; teniendo el mismo patrón. Diversa

literatura nos indica un posible efecto oxidante del sevoflurano; eso puede ser benéfico o

perjudicial dependiendo del tejido estudiado. Un estudio realizo por Bezarra y col. encontró

que el sevoflurano provoca una peroxidación lipídica, el aumento de la actividad de la G6PD

y la reducción de la actividad de la CAT. Un posible mecanismo por el cual ocurre es que el

sevoflurano promovió la alteración en la actividad de la CAT apenas en la presencia del

inductor enzimático, y ese resultado puede estar relacionado con el flúor formado en mayor

concentración durante la biotransformación del sevoflurano y con el aumento de la actividad

del ciclo catalítico de la CYP2E1. Sin embargo en la tabla 4 se ve que la actividad

antioxidante de la catalasa finalmente aumenta; la evidencia clínica indica que los agentes

inhalatorios tienen efecto organoprotector contra las consecuencias de la lesión por

isquemia-reperfusión. Aunque estos efectos se han estudiado más ampliamente en el

miocardio, se hace cada vez más obvio que están también presentes en otros tejidos. En un

estudio realizado por Ramos, M. y col encontraron que la proteína S100B sérica( las

concentraciones bajas de esta proteína está relacionado con efecto neurotrópico y que un

aumento está relacionado con la actividad neuroapoptotica) fueron significantemente

inferiores a los de S100B basal después de la inhalación del sevoflurano, es decir que podría

tener un efecto antiapoptotico o neuroprotector en el SNC. (3)(17)(18)

El sevoflurano también ejerce efectos antiinflamatorios y anti apoptóticos contra el daño

producido durante los fenómenos de reperfusión a nivel renal (Lee HT, 2006), cerebral (Lin

HF, 2009) y hepático (Beck-Schimmer B, 2008). También poseen efectos inhibitorios sobre

los neutrófilos y linfocitos in vitro, al igual que sobre la liberación de citoquinas desde las

células mononucleares. Además, influyen en la expresión de la isoenzima inducible de NO



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(iNOS), a través de la inhibición reversible de los canales calcio-voltaje-dependientes y por

la disminución en la concentración de calcio intracelular. A nivel pulmonar, en estudios

experimentales de DPA inducido tras la administración de endotoxinas, se ha comprobado

que el sevoflurano ejerce cierto efecto protector pulmonar debido a una atenuación en la

expresión de ciertos mediadores inflamatorios, menor reclutamiento leucocitario, menor

adhesión de neutrófilos a las células epiteliales alveolares y a una menor muerte celular. (19)

Otro factor importante en el comportamiento de la catalasa frente a la técnica de la anestesia

general balanceada es la cinética, no obedece un patrón Michaeliano, pues la concentración

del complejo enzima sustrato no permanece constante a través del tiempo debido a los

cambios sufridos por la enzima durante la liberación de su producto (complejo enzimático

II y III). (20)(21)

En la tabla 4, se puede observar que con respecto al TIVA se sigue el mismo patrón, y eso

se verifica en la tabla 6 al comparar el momento 3 con el 1 sin embargo en ambos casos la

actividad de la catalasa se incrementa pero no siendo estadísticamente significativo. En el

grupo TIVA se observa que el aumento de la actividad de la catalasa fue menor en

comparación con el otro grupo debido a que el propofol también cumple un efecto

antioxidante. Ballester Lujan, M. demostró que el propofol protege frente a la

lipoperoxidación e inhibir la actividad de los neutrófilos cuando se administra previo a la

isquemia; estos efectos se observan principalmente durante la fase crítica de la reperfusión

frenando la entrada de calcio y reduciendo los radicales libres; por lo tanto, tiende a tener un

efecto antioxidante en cirugías de revascularización coronaria. (22)

Un posible mecanismo del propofol tiene un mejor efecto antioxidante es debido a su

estructura química similar a la de los scavengers antioxidantes de tipo fenol como la vitamina

E, el alfatocoferol y el butilhidroxitolueno; estos antioxidantes conectan fosfolípidos de la

membrana y capturan los radicales libres y de esta forma muestran propiedades antioxidantes

al inhibir la cadena de transmisión con las moléculas de ácidos grasos de la membrana. Tiene

capacidad neutralizadora de radicales libres, y mejora la función mitocondrial. Akin, M y

colaboradores trabajaron con enzimas antioxidantes como el glutatión peroxidasa (GPx)

concluyeron que la anestesia general con propofol causó un aumento de esta enzima y una

reducción de los niveles de MDA. En nuestro estudio se puede observar el comportamiento

de la enzima catalasa aumentada tal y como ocurre con el estudio de Akin,M.(10)



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En conclusión, ambas técnicas demostraron que tiene efecto antioxidante , sin embargo

postulamos que el TIVA es más organoprotector que la anestesia general balanceada debido

a que el propofol también tiene un efecto antioxidante que apoya a la actividad antioxidante

de la catalasa.



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V. CONCLUSIONES

1. Se determinó el efecto organoprotector de la anestesia general balanceada en la


2. Se determinó el efecto organoprotector de la anestesia intravenosa total en la


3. Se comparó las variaciones de la actividad de la catalasa con Anestesia General

Balanceada y la Anestesia General Total Intravenosa en Colecistectomía

Laparoscópica.

4. Se encontró que el efecto mas organoprotector es la de la técnica intravenosa

total en comparación con la anestesia general balanceada.



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ANEXOS



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CONSENTIMIENTO INFORMADO

NOMBRE DEL PROYECTO EFECTO DE LA ANESTESIA GENERAL

BALANCEADA Y ANESTESIA INTRAVENOSA

TOTAL SOBRE LA ACTIVIDAD

ANTIOXIDANTE DE LA CATALASA EN

COLECISTECTOMÍA LAPAROSCÓPICA

INVESTIGADOR

RESPONSABLE

Q.F. BETSABE MARIANELLA CHUNGA

FLORES

I.- INFORMACIÓN

En mi calidad de Investigador Responsable del Proyecto “EFECTO DE LA

ANESTESIA GENERAL BALANCEADA Y ANESTESIA INTRAVENOSA

TOTAL SOBRE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DE LA CATALASA EN

COLECISTECTOMÍA LAPAROSCÓPICA”, necesito que Usted me autorice para

almacenar las muestras sin usar para para un uso futuro, en su propia investigación o en

la investigación de otras personas.

Usted autorizó a utilizar muestras de sangre, para usarla solamente para la investigación

actual. Por la razón anterior, es necesario que Usted pueda decidir acerca de su muestra.

Usted tiene el derecho a decidir si desea o no que su muestra sea usada para nuevos

estudios o si no desea que sea utilizada con ninguna otra finalidad.

Usted es quien decide si su muestra es usada o si hay algo para lo que no quiera que sea

utilizada, o si no desea que se utilice para ningún otro fin.



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En la mayoría de los casos, el participante debe decidir si permite a los investigadores

que mantengan la muestra, eliminando toda la información de identificación, o si aceptan

que los investigadores sepan de quien es la muestra. (Explique los riesgos y los

beneficios de cada una de estas opciones.) Informar al participante que actualmente

los/las investigadores pueden detectar a quien pertenecen las muestras.

Informe al participante que los/las investigadores tienen la obligación de informar al

participante cuando las muestras permanecen vinculadas a una persona, informar los

resultados que tienen relevancia clínica inmediata.

Informe al participante que su muestra no se venderá con fines de lucro y que cualquier

investigación en que se use su muestra deberá ser aprobada

EL DERECHO A REHUSAR Y A RETIRAR

Explique al participante que puede negarse a autorizar el almacenaje de las muestras, o poner

restricciones sobre esas muestras, sin pérdida de beneficios, y que el estudio de investigación

actual no será afectado de ninguna manera.

Infórmele al participante que puede retirar su permiso en cualquier momento y proporciónele

el nombre, la dirección y el número telefónico de la persona y la institución patrocinante,

para contacto.

CONFIDENCIALIDAD

Explique brevemente cómo se mantendrá la confidencialidad, incluyendo cualquier

limitación que pueda existir.



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II.- FORMULARIO DE CONSENTIMIENTO

Si alguna muestra de sangre que he proporcionado para este proyecto de investigación queda

sin usar o sobrante cuando se ha completado el proyecto (Marcar una opción de las

siguientes):

Deseo que mi muestra de sangre sea destruida de inmediato.

Deseo que mi muestra de sangre) se destruya después de 2 años.

Autorizo a que mi muestra de sangre sea almacenada indefinidamente.

Y si la muestra es almacenada:

Autorizo a que mi muestra de sangre sea almacenada y se use en investigación futura,

pero sólo con el mismo objetivo del proyecto de investigación actual, denominada

““EFECTO DE LA ANESTESIA GENERAL BALANCEADA Y ANESTESIA

INTRAVENOSA TOTAL SOBRE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DE LA

CATALASA EN COLECISTECTOMÍA LAPAROSCÓPICA”.

Autorizo a que mi muestra de sangre sea almacenada y se use en cualquier

investigación futura, de cualquier tipo que haya sido adecuadamente aprobada.

Autorizo a que mi muestra de sangre sea almacenada y se use en investigación futura,

excepto en investigación sobre (especificar nombre tipo de investigación)

He leído la información, o me la han leído. He tenido la oportunidad de hacer preguntas

acerca de ello y mis preguntas han sido respondidas satisfactoriamente.

Consiento voluntariamente y entiendo que tengo el derecho de retirar mi

consentimiento sin que esto afecte el estudio de investigación actual o mi atención

médica.

Nombre del Participante (con letra de

imprenta):

DNI del Participante



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Firma del Participante

Fecha(Día/mes/año)

Si es analfabeto

Un testigo que sepa leer y escribir debe firmar (si fuera posible, esta persona debe ser

seleccionada por el participante y no debe tener ninguna relación con el equipo de

investigación). Los participantes analfabetos deben incluir también el impreso de su huella

digital.

He presenciado la lectura exacta del documento de consentimiento al participante

potencial, y el individuo ha tenido la oportunidad de hacer preguntas. Confirmo que el

individuo ha dado el consentimiento libremente.

Deseo que mi identidad sea eliminada de mi muestra de sangre.

Deseo que mi identidad se mantenga con mi muestra de sangre.

Nombre del Testigo (con letra de

imprenta) :

DNI del Testigo

Huella digital del participante

Firma del Participante




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He leído con exactitud o he sido testigo de la lectura exacta del documento de

consentimiento al participante potencial, y el individuo ha tenido la oportunidad para

hacer preguntas. Confirmo que el individuo ha dado el consentimiento libremente.

Nombre del Investigador (con letra de

imprenta):

DNI del Investigador Responsable

Firma del Investigador


Copia proporcionada al participante ______ (nombre consignado por el investigador)

Nota: A usted se le dará una copia del documento completo del Consentimiento



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TABLA N°7:

Efecto de la Anestesia General Balanceada en la actividad antioxidante de la Catalasa

(U/mg).

Parámetros M1 M3 Efecto

Muestra 18 18 18

Media 0.17443 0.19601 0.02158

Desv. Estándar 0.09130 0.14095 0.16659

t -0.5453

p 0.5891

TABLA N°8:

Efecto de la Anestesia Intravenosa en la actividad antioxidante de la Catalasa (U/mg).


Muestra 18 18 18

Media 0.12787 0.13334 0.00547

Desv. Estándar 0.04967 0.04052 0.04840

t -0.3619

p 0.7197



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TABLA N°9:

Efecto de la Anestesia General Balanceada en la actividad antioxidante de la Catalasa

(U/mg), durante la Colecistectomía Laparoscópica


Muestra 18 18 18

Media 0.17443 0.16798 -0.00645

Desv. Estándar 0.09130 0.08800 0.12155

t 0.2252

p 0.8245

TABLA N°10:

Efecto de la Anestesia Intravenosa Total en la actividad antioxidante de la Catalasa

(U/mg), durante la Colecistectomía Laparoscópica


Muestra 18 18 18

Media 0.12787 0.17560 0.04773

Desv. Estándar 0.04967 0.11840 0.10769

t 1.8805

0.0773

